1. Iléectomie et anastomose
- Anesthésier des souris avec de l’isoflurane (2 à 3 %) dans une chambre d’incubation de petits animaux. Déterminer l’anesthésie adéquate à l’aide de la technique de pincement des orteils pendant que l’animal prend de l’isoflurane.
- Épilez les poils abdominaux en appliquant des produits d’épilation et essuyez les poils à l’aide d’éponges chirurgicales tout en maintenant l’anesthésie. Placez la souris sur une table d’intervention chirurgicale pour petits animaux à température contrôlée (Figure 1A) pour maintenir la température corporelle à 37 °C. Maintenez l’anesthésie avec de l’isoflurane (1 à 2 %) à l’aide d’un masque facial. Traitez les yeux de la souris avec une pommade oculaire.
- Nettoyez la peau avec de la povidone iodée et de l’alcool à 70 % et couvrez la zone chirurgicale de l’abdomen avec de la gaze chirurgicale stérile (figure 1B).
- Faites une incision abdominale médiane à l’aide d’un scalpel chirurgical une fois l’anesthésie en vigueur. Utilisez un applicateur à embout de coton pour protéger l’intestin et tirez sur le muscle abdominal de la souris à l’aide d’écarteurs pour ouvrir complètement et exposer la cavité abdominale (figure 1C).
- Localisez le cæcum. En partant du caecum vaginal, sortez avec précaution l’iléon relié et une partie du jéjunum de la cavité abdominale (Figure 1D).
note: Le caïcum peut être facilement identifié en raison de sa grande taille, même après le jeûne.
- Lister la branche supérieure de l’artère mésentérique supérieure avec une suture en soie 7-0 pour occlure le sang alimentant le segment iléal à exciser. La couleur iléale passe du rose au violet foncé après la ligature. (Figure 1E à F).
- Selon le but de l’expérience, à l’aide de ciseaux, exciser et enlever 50 % ou 90 % de l’iléon.
note: Pour une chirurgie simulée, n’effectuez pas la ligature de l’artère mésentérique supérieure et n’enlevez pas l’iléon.
- Rincer la lumière des deux extrémités iléales avec 0,9 % de solution saline.
note: Comme l’iléon intact restant reçoit toujours un apport sanguin normal de l’artère mésentérique supérieure, une petite quantité de sang sera évacuée au cours du processus. Cela indique également que l’apport sanguin aux extrémités iléales est normal et garantit l’absence d’ischémie pendant la procédure d’anastomose (Figure 1G).
- Localisez les mésentères sur le côté des deux extrémités iléales. Alignez les mésentères et suturez les extrémités iléales ensemble à l’aide de 8-0 suture (Figure 1G à H).
- Suturez la face controlatérale de l’iléon pour maintenir l’iléon anastomosé de manière naturelle (Figure 1I).
- Suturez les côtés supérieur et inférieur entre les deux sutures d’origine pour bien joindre les deux extrémités iléales (Figure 1J).
- Confirmer qu’il n’y a pas de fuite du site d’anastomose après avoir terminé la procédure de suture en trois étapes (figure 1G-I). Remettez le caecum et l’intestin grêle dans la cavité abdominale à l’emplacement anatomique d’origine. Lavez la zone chirurgicale avec une solution saline chaude à 0,9 % à l’aide d’une aiguille émoussée. (Figure 1K).
- Fermez l’incision de la couche musculaire abdominale avec une suture 6-0. Alignez l’incision cutanée abdominale à l’aide d’une pince et suturez la peau abdominale pour faciliter une cicatrisation optimale de la plaie (Figure 1L).
2. Soins postopératoires
- Transférez les souris post-opératoires dans une unité de soins intensifs pour la récupération. Rangez-les dans une cage en papier sur un coussin chauffant à température contrôlée pour poursuivre la récupération post-opératoire pendant la nuit. Fournissez aux souris de la nourriture molle en plus de la nourriture et de l’eau ordinaires.
- Administrer de la buprénorphine (0,05 - 0,1 mg/kg) avec une injection sous-cutanée toutes les 8 à 12 h pour l’analgésie.
note: Euthanasier les souris par le CO2 si elles sont gravement malades.
- Au point final, sacrifier les souris à l’aide d’isoflurane surdosé et prélever des échantillons au besoin (section 3).
3. Évaluation de la suraccumulation de bile induite par l’iléectomie
- Pesez et disséquez les souris un jour après la résection de 0 % (simulacre), 50 % ou 90 % de l’iléon.
- Retirez le tractus gastro-intestinal et pesez-le. Calculer le rapport poids/poids corporel pour évaluer la gravité de la malabsorption et de la suraccumulation des sels biliaires.
- Transférez les voies gastro-intestinales dans des tubes coniques de 15 ml et coupez-les en courts segments à l’aide de ciseaux. Après la coupe, centrifuger à 3 000 x g pendant 10 min. Transférez le surnageant (liquide gastro-intestinal contenant des sels biliaires) dans un tube propre.
- Mesurez le volume et le poids totaux du liquide gastro-intestinal et calculez le rapport poids/poids du tractus gastro-intestinal pour évaluer davantage la suraccumulation de bile dans le tractus gastro-intestinal.
- Déterminer la quantité totale de bile dans le surnageant par dosage des acides biliaires.