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Microdissection laser : une technique pour isoler les cellules envahissantes du cancer colorectal à partir d’un modèle de culture organotypique 3D

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30 avril 2023

Dans cet article

Résumé

Source : Bullock M. et al., Profilage moléculaire du microenvironnement tumoral invasif dans un modèle tridimensionnel de cellules cancéreuses colorectales et de fibroblastes ex vivo. J. Vis. Exp. (2014).

La vidéo décrit la dissection laser du modèle de co-culture organotypique 3D avec une précision au micron. Dans les modèles organotypiques 3D, les constituants stromaux tels que les fibroblastes sont co-cultivés en 3 dimensions avec des cellules épithéliales cancéreuses. Le modèle 3D sert d’outil expérimental qui permet d’étudier l’invasion et les interactions cancer-stroma dans des conditions quasi physiologiques.

Protocole

1. Préparation organotypique :

Préparation du gel organotypique imprégné de fibroblastes :

  1. Préparer une suspension de cellules de fibroblastes contenant 5 x 105 cellules par organotypique dans du DMEM complété par 10 % de FCS et 292 μg/ml de L-Glutamine.
  2. Préparez les gels organotypiques sur glace dans les proportions suivantes :
    • • 7 volumes de Rat-Tail Collagen : mélange de Matrigel (1:1)
    • • 1 volume de DMEM 10x filtré
    • • 1 volume de FCS
    • • 1 volume de suspension de cellules de fibroblastes contenant 5 x 105 fibroblastes
      Pour 9 gel....

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Déclarations de divulgation

Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Lignées cellulaires de cancer colorectal - exemple présenté SW480ATCCATCC CCL-228
collagèneBD Biosciences354265
MatrigelBD Biosciences354234
Membrane en nylonMerck MilliporeVVLP01300
Grille métalliqueL’entreprise MeshWSS20-A4themeshcompany.com
Plateforme de microdissection laserMicrosystèmes LeicaLeica AS LMD
Glissières montées sur membraneDispositifs moléculaires
Cresyl VioletMerck Millipore1052350025

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Mots-clés

Culture organotypique 3Dsectionnement de tissusinclusion en paraffinecoloration au violet de cresylprotocole de microdissectionfront d invasion tumoraletampon de lyse cellulairelames membrane

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