Dosage de la cytométrie de traction : une méthode pour quantifier la force de traction exercée par les cellules cancéreuses sur l’ECM

Résumé

Source : Ali, M. Y., et al. Isolement de cellules tumorales primaires du côlon humain à partir de tissus chirurgicaux et leur culture directement sur des substrats élastiques souples pour la cytométrie de traction. J. Vis. Exp. (2015).

Cette vidéo décrit le test de microscopie à force de traction. Le test détermine la traction cellulaire des cellules cancéreuses du côlon humain sur la matrice extracellulaire présente sur un hydrogel élastique mou ayant des billes fluorescentes intégrées. Le déplacement résultant des billes fluorescentes est mesuré à l’aide d’un logiciel approprié.

Protocole

1. Essai de microscopie à force de traction

1. Réchauffer une solution de trypsine-EDTA/SDS à 0,25 % à 37 °C dans un bain-marie pendant 10 minutes avant le début des expériences de traction.
2. Retirer un gel (fonctionnaliser les gels de PA et le verre avec des molécules ECM, fibronectine humaine à une concentration de 50 μg/ml) de l’incubateur de culture cellulaire à la fois et à l’endroit sur la platine du microscope inversé fluorescent (grossissement 32X).
3. Recherchez une seule cellule dans le champ de vision. Retirez le couvercle de la boîte de Pétri.
4. Prenez une image en contraste de phase de la cellule (p. e....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pbs	Lonza	17-516F
trypsine	Worthington	LS003736
acrylamide	Sigma-Aldrich	A4058
N-méthylènebisacrylamide (bis)	Sigma-Aldrich	M1533
Fibronectine humaine	BD biosciences	354008
Perles fluroscentes de 0,1 μm	Technologies du vivant	F8801
0,25 % Trypsine-EDTA	Technologies du vivant	Référence 25200-056
Couvercles en verre de 12 mm2	Corning	Référence 2865-12