Isolement de cellules souches de mélanome : une méthode pour obtenir des cellules de mélanome CD133 positives et négatives à l’aide du tri cellulaire activé par magnétisme

Résumé

Source : Welte, Y. et al. Culture cellulaire dérivée d’un patient et isolement de cellules souches cancéreuses présumées CD133+ à partir d’un mélanome. J. Vis. Exp. (2013)

Cette vidéo décrit la technique d’isolement des cellules souches de mélanome CD133 négatives et positives à partir d’une lignée cellulaire de mélanome primaire à l’aide du tri cellulaire activé magnétiquement. Les CSC de mélanome CD133 positifs sont étudiés plus en détail pour comprendre les mécanismes de la tumorigenèse du mélanome.

Protocole

1. Tri magnétique des cellules de mélanome CD133⁺ et CD133^- à l’aide de colonnes LS

1. Préparez un tampon MACS contenant 2 mM d’EDTA et 5 % de FCS dans PBS. Mélanger par inversion et tampon de filtrat stérile à l’aide d’une unité de filtration Steritop-GP de 0,22 μm. Réfrigérer le tampon à 4-8 °C et dégazer avant utilisation.
2. Préchauffez l’Accutase, le PBS et le Quantum 263 à 37 °C.
3. Laver 80 % des cellules confluentes avec du PBS. Ajoutez une quantité appropriée d’Accutase et incubez jusqu’à ce que les cellules se détachent de la surface de la culture. Prélever les cellules dans un tube de 50 mL à l’a....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Accutase	Laboratoires PAA GmbH	N° L11-007
Sel disodique de l’acide éthylènediaminetétraacétique déshydraté (EDTA)	Sigma-Aldrich, Inc.	E-7889
CD133/1 (W6B3C1)	Miltenyi Biotec GmbH	Tél. : 130-092-395
Kit Micro-billes CD133 indirectes humaines	Miltenyi Biotec GmbH	Tél. : 130-091-895	Comprend : CD133/1(AC133)-Biotine, microbilles anti-biotine et réactif bloquant FcR
Quantique 263	Laboratoires PAA GmbH	U15-815
Séparateur MACS Multi Stand	Miltenyi Biotec GmbH	Tél. : 130-042-303
Colonnes de séparation MACS 25 colonnes LS	Miltenyi Biotec GmbH	Tél. : 130-042-401
Séparateur QuadroMACS	Miltenyi Biotec GmbH	Tél. : 130-090-976