Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Animaux de laboratoire, réactifs et équipements
- Utilisez des souris du même âge et du même sexe. Commencez l’étude à l’âge de 7 à 9 semaines, car la peau de la plupart des souris est en télogène (la phase de repos) vers cet âge.
- Observez le comportement des animaux pendant l’étude et s’ils se battent, ce qui arrive souvent avec les mâles, hébergez-les séparément. Les combats peuvent provoquer des coupures dans la peau, ce qui favorise la formation de tumeurs. Les souris femelles sont préférées en raison de leur comportement moins agressif. La taille typique d’un groupe expérimental varie entre 8 et 20 animaux par groupe.
note: Les calculs de puissance basés sur la variance biologique observée dans les études précédentes aident à choisir une taille de groupe suffisamment grande. Les souches utilisées comme exemples dans cet article incluent Balb/c et C57BL/6. Cependant, de nombreuses autres souches de souris, telles que SENCAR et FVB, ont été utilisées avec le modèle DMBA-TPA et les rats Wistar et Sprague-Dawley. Une licence du comité national ou local de travail sur les animaux est nécessaire avant le début de l’étude. En plus des considérations générales de bien-être, les critères d’évaluation spécifiques au modèle sont généralement le carcinome épidermoïde (SCC) et l’infection de la peau. Les égratignures de la peau dues à des démangeaisons après l’application de produits chimiques tumorigènes dans l’acétone sont typiques, mais sinon, les animaux ne devraient montrer aucun signe d’inconfort. Une pesée régulière (par exemple, 2 fois par mois) permet d'évaluer le bien-être des animaux.
- Utilisez du DMBA et du TPA, tous deux dilués dans de l’acétone. La concentration de travail de DMBA est de 250 g/L. Une dose pour un animal est de 50 μg de DMBA dans 200 μL d’acétone. La concentration de la matière de TPA est de 125 g/L et la concentration de traitement de 25 g/L. Une dose de TPA pour un animal est de 5 μg dans 200 μL d’acétone.
ATTENTION : Le DMBA est nocif en cas d’ingestion et peut causer le cancer. L’acétone s’évapore rapidement et est inflammable. Il peut provoquer des étourdissements et irriter les yeux. Utilisez un masque respiratoire et/ou travaillez sous un flux d’aspiration. Changez de gants après avoir manipulé l’un de ces produits chimiques. Des cages ventilées individuellement empêchent la propagation des produits chimiques pendant le logement des souris. Après l’application, rassemblez les pointes de pipette utilisées pour manipuler le DMBA et jetez-les avec des déchets dangereux.
note: Le DMBA doit être protégé de la lumière. Le TPA dilué est stocké à -20 °C, de préférence à l’abri de la lumière.
- Procurez-vous l’équipement suivant : une balance, un rasoir ordinaire pour la fourrure, des pipettes et des pointes de taille appropriée, une règle ordinaire, un appareil photo numérique, un bloc-notes et un stylo ou un ordinateur pour enregistrer les papillomes, un système d’anesthésie par inhalation ou un dispositif de contention pour souris avec une ouverture sur le dessus arrière, et un système de narcose au dioxyde de carbone pour sacrifier les souris.
2. Induction et promotion du papillome cutané
- Rasez la peau du dos et pesez l’animal. Plus tard, rasez la peau chaque fois que nécessaire, mais pas au moment de l’exposition aux produits chimiques.
note: Soyez prudent lorsque vous vous rasez autour des papillomes et évitez de faire des coupures sur la peau. Pesez chaque animal toutes les 2 semaines pour remarquer toute perte de poids potentielle.
- Appliquer localement 50 μg de DMBA dans 200 μL d’acétone sur la zone rasée à l’aide d’une pipette 48 h après le rasage de la fourrure. Si nécessaire, immobiliser l’animal à l’aide d’une légère anesthésie par inhalation ou d’un dispositif de contention pour souris.
- Après 7 jours, administrez la première dose de TPA. Appliquer localement 5 g de TPA dans 200 μL d’acétone à l’aide d’une pipette 2 fois par semaine, de préférence le lundi et le jeudi ou le mardi et le vendredi.
- Comptez, enregistrez et photographiez les papillomes chaque semaine. Une masse palpable de plus de 1 mm de diamètre est considérée comme un papillome si elle dure plus d’une semaine. Marquez chaque papillome sur une carte et indiquez sa taille chaque semaine – stockez des photos numériques.
