Visualisation de l’expression des protéines basée sur CUBIC : une procédure de visualisation de l’expression des protéines dans des biopsies de peau de souris de pleine épaisseur

Abstract

Source : Liang, H. et al. protocole CUBIC visualise l’expression des protéines à une résolution de cellule unique dans des préparations de peau entière. J. Vis. Exp (2016)

Cette vidéo décrit la technique de visualisation basée sur CUBIC, une technique d’imagerie dépendante du nettoyage tissulaire pour l’évaluation visuelle de l’expression des protéines dans les biopsies cutanées entières à une résolution de cellule unique en 3D. Ce protocole techniquement simple permet de visualiser les protéines de la peau sans préparer de coupes de peau.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Préparation du tissu cutané transparent de souris

REMARQUE : Toutes les souris utilisées dans cette étude avaient un fond génétique C57BL/6

1. Collecte de tissu cutané de souris.
   1. Euthanasier sans cruauté les souris par luxation cervicale.
   2. Retirez soigneusement les poils de la zone cutanée concernée à l’aide d’une tondeuse en prenant soin de ne pas blesser la peau.
   3. Lavez la ....

Results

Figure 1 : Préparation de la chambre d’imagerie. R : Les consommables nécessaires à la préparation de la chambre d’imagerie sont le bleu collant, la pâte à modeler ou similaire et 2 lamelles (24 x 50 mm). B : Préparez deux fines bandes de colle bleue (diamètre d’environ 2 mm x 2 cm) et deux lamelles. C : Placez des bandes adhésives bleues sur une lamelle, en l.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
paraformaldéhyde	Sigma-Aldrich	Réf. P6418
Éthanol à 96 % (non dénaturé)	Approvisionnement en produits chimiques	UN1170
4',6-diamidino-2-phénylindole (DAPI)	Roche	10236276001
N,N,N',N'-tétrakis (2-hydroxypropyl) éthylènediamine	Merck Millipore	Référence 821940
Éther de polyéthylène glycol mono-p-isooctylphényle	Merck Millipore	648462
Triton X-100	Merck Millipore	648462
saccharose	Sigma-Aldrich	S0389
Température de coupe optimale (OCTOBRE) Composé	Tissu-Tek	Réf. 4583
anticorps anti-kératine14	Covance	PRB-155P
anticorps anti-Ki67	Abcam	AB16667
Âne anti-lapin Alexa 594	Technologies de la vie	N° A21207
Diméthylsulfoxyde	Sigma-Aldrich	D2650
urée	Merck Millipore	Référence 66612
2,2′,2′-nitrilotriéthanol	Merck Millipore	137002
Microscope confocal	Nikon Instruments Inc	Nikon A1 - Microscope confocal
cruZer6 Tondeuse pour le visage	Braun	Visage Braun cruZer6
Azoture de sodium	Sigma-Aldrich	438456