Dosage de la dose érythémateuse minimale : méthode de mesure de la sensibilité aux UV dans des modèles murins

Résumé

Source : Amaro-Ortiz, A. et al. Induction pharmacologique de la mélanine épidermique et protection contre les coups de soleil dans un modèle murin humanisé. J. Vis. Exp. (2013)

Cette vidéo décrit une méthode de mesure de la sensibilité aux UV dans un modèle de souris humanisée, un modèle de souris qui imite la peau humaine. Nous déterminons la dose érythémateuse minimale (DME) de rayonnement UV qui peut provoquer un érythème ou un œdème sur la peau. La méthode peut aider à déterminer l’efficacité des médicaments utilisés pour réduire la sensibilité aux UV.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

Détermination de la sensibilité aux UV par calcul de la « dose érythémateuse minimale » (MED)

1. Utilisez des animaux qui ont été prétraités avec du véhicule ou de la forskoline. Anesthésier les animaux par injection intrapéritonéale d’un mélange standard de kétamine et de xylazine.
2. Préparez un morceau de ruban adhésif UV-occlusif pour le test MED. Pour créer des trous dans le ruban, utilisez une perforatrice robuste avec une découpe circulaire de 1 cm² (figures 1A et B). Le fait d’avoir des trous d’une taille définie et d’une disposition symétrique dans le ruban facilite la reconnaissance des modifications cutanées après l’irradiation. Sur chaque trou du ruban, appliquez un petit morceau de ruban facilement détachable qui peut être retiré à des moments définis pendant l’exposition aux UV pour permettre l’administration de différentes doses d’UV.
3. Une fois que les animaux sont suffisamment sédatifs, placez le ruban adhésif sur la surface dorsale. Un lubrifiant pour les yeux doit toujours être utilisé sous anesthésie.
4. Allumez la source UV composée de deux lampes Westinghouse F15T8UV-B avec une puissance de crête de 313 nm et une plage de 280-370 nm. Laissez la lampe s’équilibrer à une sortie UV constante mesurée par un photomètre UV avec un capteur UVB (il faut généralement quelques minutes pour que les lampes se réchauffent).
5. Sur la base du taux de transmission des UV mesuré par le photomètre UV, calculez le temps d’exposition aux UV pour chaque dose souhaitée. Par exemple, la sortie UVB de notre lampe mesure 2,4 mW/cm². Par conséquent, pour administrer 5 kJ/m², la peau devrait être exposée à 208 secondes (soit 3 minutes et 28 secondes) de rayonnement UVB, comme calculé ci-dessous :
   
6. Placez les animaux sous sédation (chacun avec du ruban occlusif en place) sur la surface ventrale pour assurer une exposition uniforme aux UV. Pour administrer les doses choisies de rayonnement UV, retirez séquentiellement les petites bandes occlusives recouvrant les trous pour exposer des zones de 1^cm2 de peau aux doses correctes de rayonnement. Par conséquent, en utilisant l’exemple ci-dessus, si 40 kJ/m² est la dose la plus importante dans l’expérience, alors l’animal serait sous la lampe pendant 27 min et 47 secondes au total et la peau dans la condition de 40 kJ/m² n’aurait pas de ruban adhésif sus-jacent tout le temps. Cependant, le ruban recouvrant la condition de 5 kJ/m² serait retiré lorsqu’il resterait 208 secondes à l’exposition. Le moment du retrait du ruban doit être tel que chaque condition se termine simultanément.
7. Après l’exposition aux UV, décollez soigneusement le ruban de la peau dorsale, en prenant soin de ne pas déchirer la peau avec des mouvements brusques ou trop violents. Placez les animaux dans un endroit chaud et calme pour permettre la récupération de l’anesthésie.
8. Surveillez les souris pendant 24 à 48 heures pour rechercher des zones discrètes d’érythème (rougeur) ou d’œdème (gonflement) correspondant aux sites anatomiques exposés à la dose spécifique d’irradiation UV. Documentez les traces de peau de manière photographique.
9. La valeur MED correspond à la dose minimale d’UV qui provoque une inflammation définie par un érythème et/ou un œdème de l’ensemble du cercle de peau exposé. Notez que la pigmentation de la peau peut contester la détermination de la MED, cependant, l’érythème et l’œdème peuvent généralement être évalués avec précision, en partie grâce à la forme définie des ouvertures du ruban pendant l’exposition aux UV.

Résultats

Graphique 1. La mélanisation induite par la forskoline protège contre l’inflammation médiée par les UV, déterminée par le test de dose érythémateuse minimale (MED). (A,B) Position de la bande occlusive UV et doses UVB des animaux traités deux fois par jour pendant 5 jours (A, C) ou une fois par jour pendant 15 jours (B, D, E) avec un véhicule ou de la forskoli...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Xylazine	Injection Anased	LA04612	Shenandoah, Iowa, États-Unis
Kétamine HCl, USP	Putney	NDC 26637-411-01	St. Joseph, MO, États-Unis
éthanol	Laboratoires de décon.	Référence 2705
Crème dépilatoire, Nair	Église Dwight	JF-11 4381322	Priceton, NJ
Lampe germicide Hg UV-B	Westinghouse	F15T8UV-B
Photomètre radiomètre	Lumière internationale	1LT400A	Peabody, MA, États-Unis
Isothésie, Isoflurane , USP	Butler Schein	Référence NCD 11695-6776-1	Dublin, OH, États-Unis
Chromamètre	Konica Minolta	CR-400	Ramsey, NJ, États-Unis
Processeur de données pour chromamètre CR-400	Konica Minolta	DR-400	Ramsey, NJ, États-Unis