Enregistrement Comportement multicellulaire en Myxococcus xanthus Les biofilms en utilisant Time-lapse microcinématographie

Résumé

Pour étudier Myxococcus xanthus, nous avons conçu un protocole microcinématographie time-lapse qui peut être modifié pour des analyses différentes. Il emploie des conditions de croissance standard adaptés pour la microscopie, et donne des résultats reproductibles en utilisant des joints en silicone, peu coûteux réutilisables. Nous avons utilisé cette méthode pour quantifier la chimiotaxie multicellulaires.

Résumé

Un essaim de la δ-protéobactérie xanthus Myxococcus contient des millions de cellules qui agissent comme un collectif, le mouvement de coordination à travers une série de signaux complexes pour créer des modèles dynamiques, en réponse à des signaux environnementaux. Ces modèles sont auto-organisation et émergence; ils ne peuvent pas être prédits en observant le comportement des cellules individuelles. En utilisant un test time-lapse microcinématographie suivi, nous avons identifié un modèle distinct émergente dans M. xanthus appelé chimiotactisme, défini comme le mouvement dirigé d'un essaim d'un gradient de nutriment vers la source ^1.

Afin de caractériser efficacement la chimiotaxie par time-lapse microcinématographie, nous avons développé une très plaque modifiables complexe (figure 1) et construit un groupe de 8 microscopes (figure 2), chacune capable de capturer des vidéos time-lapse. Le test est assez rigoureux pour permettre la réplication cohérente des données quantifiables, et le resulting vidéos nous permettent d'observer et de suivre les changements subtils dans le comportement essaim. Une fois capturés, les vidéos sont transférées à un ordinateur d'analyse / de stockage avec assez de mémoire pour traiter et stocker des milliers de vidéos. La flexibilité de cette configuration s'est avéré utile pour plusieurs membres de la M. xanthus communauté.

Protocole

Fournitures nécessaires:

• Klett mètres
• Pipette et pointes
• 2,5 ml microtubes
• Microcentrifugeuse
• CTTYE médias:
  • 1,0% casitone (Difco Laboratories), extrait de levure 0,5% (Difco Laboratories),
  • 10,0 mM Tris-HCl (pH 8,0), 1,0 mM KH ₂ PO _4, 8,0 mM MgSO ₄
• TPM médias:
  • 10,0 mM Tris-HCl (pH 8,0), 1,0 mM KH ₂ PO _4, 8,0 mM MgSO ₄
• Agarose
• Bain-marie réglé à 55 ° C
• Lames de microscope
• Lamelles de verre de grandes
• 2 x 2 cm, 0,5 mm d'épaisseur de joint en caoutch....

Discussion

Time-lapse microcinématographie (TM) est devenu une approche standard à l'étude de la motilité procaryote ^2-7. Traditionnellement, TM est effectuée en utilisant des mèches de papier filtre, blocs de gélose ou en plaques minces, en tant que substrats de gélose ^8-11. Ces méthodes sont adéquates et rentable lorsqu'il est utilisé pour générer des séquences d'images d'illustrations généraux du mouvement bactérienne. Toutefois, si des séquences d'images doit se traduire par la product.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom du produit	Type	Entreprise	Numéro de catalogue	Commenter
Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Casitone 1,0%		Difco Laboratories
0,5% d'extrait de levure		Difco Laboratories
Micro-pipette d'échantillonnage		Pêcheur
100 ul pointe de verre jetable		Pêcheur
2 x 2 cm, 0,5 mm d'épaisseur de joint en caoutchouc de silicone		Grâce Bio-Lab Inc