Préparation des tendons de queue de rat pour les études biomécaniques et mécanobiologique

Résumé

Cet article décrit les procédures expérimentales utilisées pour préparer les tendons de queue de rat pour les études biomécaniques et mécanobiologique. Plusieurs caractéristiques des principales étapes de préparation sont démontrées, à commencer par l'extraction, la mesure de la superficie transversale, le rinçage et le chargement dans la chambre de bioréacteur.

Résumé

Tendons de queue de rat (RTT) sont un modèle commun biologiques utilisés dans études expérimentales in vitro dans les domaines de la physiologie des tendons et des tendinopathies. Travailler avec ces tissus est difficile car ils sont très fragiles, et jusqu'à présent il n'y avait pas de protocole rigoureusement détaillées de leur isolement.

Face à ces défis, nous avons développé des méthodes et des instruments pour faciliter la manipulation des RTT et des tissus de contrôle de viabilité, la stérilité et l'intégrité. Cet article décrit les procédures expérimentales utilisées pour préparer RTT pour les études biomécaniques et mécanobiologique. Notre travail est divisé en quatre grandes étapes: l'extraction, la mesure de la superficie transversale, le rinçage et le chargement dans la chambre de bioréacteur.

A chaque étape, toutes les procédures, les matériaux et les manipulations sont présentés en détail afin qu'ils puissent être facilement reproduits. Par ailleurs, les instruments spécifiques développés sont présentés: une plaque de manipulation utilisée pour séparer RTT, un micromètre optique à la position du tissu pendant la mesure de la superficie transversale et un système d'ancrage pour attacher les RTT sur un bioréacteur.

Enfin, nous décrivons les résultats obtenus après plusieurs tests afin de valider nos méthodes. Évaluations de la viabilité, la stérilité et l'intégrité de démontrer que nos procédures sont suffisamment rigoureux pour les manipulations des tissus fragiles tels que les tendons de queue de rat.

Protocole

Avant toute manipulation, vous devez identifier le groupe de tendons à être utilisés en fonction de l'expérience que vous menez et l'appareil à votre disposition. Pour nos besoins, les tendons ventrale ont été choisis parce qu'ils sont plus petits et donc plus faciles à manipuler lors de la mesure de la section transversale et leur montage dans la chambre de bioréacteur.

S'il vous plaît noter que tous les instruments sont stérilisés à l'autoclave ou 70% d'éthanol. Par ailleurs, un vaporisateur contenant de l'éthanol à 70% est placé à côté de chaque station de travail pour stériliser les gants expérimentateurs avant chaque opération.

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Discussion

En appliquant ces procédures expérimentales, nous pouvons mener une grande variété d'études in vitro sur ce type de tissus. Comme par exemple, une étude sur la dégénérescence des tissus a été réalisée par l'application de la sous-stimulation à la RTT, pour une période de dix jours. Chaque jour, nous avons évalué les propriétés mécaniques dans les tissus des essais non destructifs de relaxation des contraintes. A la fin, nous avons pu observer des variations de stress RTT et donc analyser la progression.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
D-PBS	Réactif	Wisent Inc.	311-410-CL	Solution saline
Glucose	Réactif	Wisent Inc.	609-037-EL	Solution saline 1g/L
Antibiotiques-antimycosiques	Réactif	Invitrogen	15240-062	Solution saline 1%
DMEM	Réactif	Invitrogen	12800-017	Solution de culture
Bicarbonate de sodium	Réactif	Wisent Inc.	600-105-CG	Solution de culture 3,7g/L
FBS	Réactif	Wisent Inc.	090150	Solution de culture 10%
Antibiotiques-antimycosiques	Réactif	Invitrogen	15240-062	Solution de culture 1%
Micromètre optique	Outil	Personnalisé
Plaque de manipulation	Outil	Personnalisé
Chambre de bioréacteur	Outil	Personnalisé