Microscopie intravitale de la microcirculation cérébrale souris en utilisant une fenêtre fermée crânienne

Summary

Microscopie intravitale à suivre spatiale et temporelle des événements hémodynamiques et inflammatoires dans la microcirculation piales.

Abstract

Ce modèle expérimental a été conçu pour évaluer la microcirculation souris piales cours aiguës et chroniques, hémodynamiques physiologiques et physiopathologiques, maladies inflammatoires et métaboliques, à l'aide de la microscopie par fluorescence in vivo. Une fenêtre fermée crânienne est placé sur la gauche du cortex pariéto-occipitale de la souris. Microcirculation locale est enregistrée en temps réel à travers la fenêtre en utilisant le PEV et d'illumination par fluorescence, et des mesures de diamètres des navires et des globules rouges (GR) les vitesses sont effectuées. Vitesse de RBC est mesurée à l'aide en temps réel de corrélation croisée et / ou érythrocytes marqués par fluorescence. L'adhésion leucocytaire et plaquettaire aux navires piales et l'évaluation de la perfusion et les fuites vasculaires sont faites avec l'aide de marqueurs marqué par fluorescence tels que les anticorps d'albumine-FITC et anti-CD45-TXR. Microcirculation peut être à plusieurs reprises enregistrées sur vidéo pendant plusieurs jours. Nous avons utilisé pour la première fois la microscopie intravitale fermer la fenêtre du cerveau pour étudier la microcirculation piales de suivre les changements dynamiques au cours de Plasmodium berghei ANKA l'infection chez la souris et montrent que l'expression de la CM est associée à des dysfonctionnements microcirculatoires caractérisé par une vasoconstriction, une diminution profonde dans le sang de flux et de l'effondrement à terme vasculaires.

Protocol

1. Craniotomie

Une craniotomie en 8 à 10 semaines des souris âgées doit être effectuée à l'avance comme ^une décrits précédemment, sauf que la barre de titane n'est pas placé à la tête de l'animal. La fenêtre chroniques crânienne est un examen permettant préparation stable de la microcirculation piales voire des mois après son implantation. Habituellement, nous effectuons nos études 2-3 semaines après l'implantation fenêtre crânienne.

2. Microscopie intravitale

1. Deux-trois semaines après la craniotomie, la température du corps est cochée, puis la souris est légèrement anesthésiés à l'isoflura....

Discussion

La méthode décrite ici microscopie intravitale fournit un outil unique et puissant pour l'observation détaillée de la microcirculation piales chez la souris. Il permet singulariser artérioles et veinules individuels et de mesurer les changements d'un certain nombre de paramètres tels que diamètre des vaisseaux, des vitesses de RBC, le flux sanguin, l'adhérence et le laminage des leucocytes, des plaquettes et d'autres éléments du sang, des fuites vasculaires, le pH et pO2 tissus et potentiellement de nomb.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurane	Baxter International Inc.
Colorant carbocyanine Dil	Molecular Probes, Life Technologies	D306
Albumine-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517
P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865