Approche stéréotaxique de la citerne magna pour l’administration thérapeutique dans un modèle murin

Résumé

Source : Joshi, K., et al. Approche chirurgicale stéréotaxique pour micro-injecter le tronc cérébral caudal et la moelle épinière cervicale supérieure via la citerne grande chez la souris. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo démontre l’approche stéréotaxique de la citerne magna pour une administration ciblée au tronc cérébral et à la moelle épinière supérieure. En accédant à la citerne magna remplie de liquide céphalo-rachidien, cette approche permet des injections précises dans des zones difficiles à atteindre à l’aide de méthodes stéréotaxiques standard.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Ouverture de la membrane cisternale

1. Utilisez la pince de Dumont coudée pour saisir la dure-mère, qui s’étend de l’os occipital à l’atlas. Saisissez la dure-mère près de l’os occipital et utilisez les ciseaux à ressort pour faire une petite ouverture (~0,5 à 1,5 mm) dans la dure-mère.
   REMARQUE : À cet endroit rostral, l’espace entre le tronc cérébral et la dure-mère sus-jacente est le plus large, offrant suffisamment d’espace pour manipuler la dure-mère en toute sécurité.
2. Utilisez les ciseaux à ressort pour soulever la dure-mère et l’ouvrir davantage. La taille de la fenêtre dépend de la cible.
   REMARQUE : Une fenêtre plus grande sera nécessaire lors de plusieurs injections longitudinales ou bilatérales ; Une petite fenêtre sera suffisante lors d’injections unilatérales ou médianes uniques.
3. Une fois la dure-mère ouverte, égouttez l’excès de liquide céphalo-rachidien avec une pointe stérile.

2. Identification des points de repère et du point zéro

1. Visualisez la surface dorsale du tronc cérébral avec des points de repère détaillés à travers la dure-mère ouverte. L’obex, le point où le canal central s’ouvre dans le ventricule IV, est le point zéro standard antéro-postérieur et médiolatéral.

3. Injection de la cible

1. Abaissez la pipette ou la seringue vers la cible à l’aide du bras stéréotaxique et injectez la solution comme pour les approches stéréotaxiques standard. Laisser en place pendant 1 à 5 minutes après l’injection pour éviter une trace d’aiguille lors de l’utilisation de volumes compris entre 3 et 50 nL. Ensuite, soulevez la pipette ou la seringue à l’aide du bras stéréotaxique.
2. Répétez l’étape 3.1. pour plusieurs cibles.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pince coudée, Dumont 5/45	FST	11251-35	Uniquement pour saisir dura
Ciseaux à ressort, Vannas 2.5mm avec boîte d’accompagnement	FST	15002-08	Ciseaux uniquement pour ouvrir la dure, boîte pour élever le corps
Micromanipulateur stéréotaxique	Kopf	1760-61	Fixé au porte-électrode pour ajuster la position en fonction des coordonnées
Ensemble de cadre stéréotaxique en « U » et plaque de base intracellulaire	Kopf	1730-B, 1711	Cadre pour chirurgie
Applicateurs stériles à embout en coton	Puritan	25-806 10WC	Absorption du sang du champ opératoire