Administration soutenue d’un facteur de croissance nerveuse à l’aide d’un film de silicium poreux dans des cellules de phéochromocytome de rat 12

Résumé

Source : Rosenberg, M., et al. Conception de films de silicium poreux comme porteurs de facteur de croissance nerveuse. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo démontre l’utilisation d’un film de silicium poreux nanostructuré (PSi) dégradable pour la libération prolongée de facteur de croissance nerveuse (NGF) afin de soutenir la différenciation des cellules PC12. Le NGF est adsorbé sur les pores du film par des interactions électrostatiques et est progressivement libéré dans le milieu par diffusion et dégradation de l’échafaudage. Cette administration contrôlée favorise la survie des cellules PC12 et facilite la croissance et la ramification des neurites sur une période prolongée.

Protocole

1. Fabrication de supports de silicium poreux oxydé (PSiO₂)

1. Découpe une plaquette de silicium (Si) (face unique polie sur la face <100> et fortement dopée au bore, de type p, 0,95 mΩ·cm) en échantillons de 1,5 cm × 1,5 cm à l’aide d’un stylo à pointe de diamant.
2. Oxyder les échantillons de Si dans un four tubulaire à 400 °C pendant 2 h à l’air ambiant (vitesse de chauffage : 25 °C/min, refroidissement naturel).
3. Immergez les échantillons de Si dans une solution aqueuse d’acide fluorhydrique (HF) (48 %), d’eau doublement distillée (ddH₂O) et d’éthanol (99,9 %) (1:1:3 v/v/v) pendant 5 min, puis rincez les échantillons à l’éthan....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Acetone	Gadot	830101375
Amphotéricine	Biological Industries	03-028-1B
Aqueous HF (48 %)	Merck	101513
AZ4533 photoresist	Metal Chem, Inc.	AZ4533
BSA fraction v	MP biomedicals	216006950
solution BSA (10 %)	Biological Industries	03-010-1B
Collagène de type l	Corning Inc.
Collagenase	Enco	LS004176
Lamelles en plastique enduites de collagène	NUNC Thermanox	1059846
D-(+)-glucose	Sigma-Aldrich Chemicals	G8170
Dispase-II	Sigma-Aldrich Chemicals	4942078001 Absolu d’éthanol
(99,9 %)	Merck	818760
FBS	Biological Industries	04-121-1A
Guanidine-HCl	Sigma-Aldrich Chemicals	G7294
Mélange de nutriments Ham F-12 Thermo	Scientific	11765054
HBSS	Thermo Scientific	14185-045
HEPES (1M)	Thermo Scientific	15630-056
HS	Biological Industries	04-124-1A
L-15 medium	Sigma-Aldrich Chemicals	L5520
Laminin	Thermo Scientific	23017015
L-glutamine	Biological Industries	03-020-1A
Murine β-NGF	Peprotech	450-34-20
Âne normal sérum (NDS)	Sigma-Aldrich Chemicals	G9023
Papain	Sigma-Aldrich Chemicals	p-4762
PBS (pH 7,4)			Préparé par dissolution de 10 mM de Na₂HPO₄, 1,8 mM de KH₂PO₄, 137 mM de NaCl et de 2,7 mM de KCl dans de l’eau bidistillée (ddH₂O, 18 MΩ·cm).
PBS X10	Biological Industries	02-020-1A
Lignée cellulaire PC12	ATCC	CRL-1721
Pénicilline-streptomycine	Biological Industries	03-032-1B
Poly-L-lysine	Sigma-Aldrich Chemicals	P4832
Réactif PrestoBlue	Thermo Scientific	A13261
RPMI medium	Biological Industries	01-100-1A
Si, plaquette	Siltronix Corp.		Hautement dopé B, type p, résistivité de 0,00095 Ω cm, orienté <100>
azoture de sodium	Sigma-Aldrich Chemicals	S2002
Hydroxyde de sodium (NaOH)	Sigma-Aldrich Chemicals	S8045
Acide tannique	Sigma-Aldrich Chemicals	403040
Triton X-100	Chem-Impex International Inc.	1279

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