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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
Des souris C57BL/6N mâles adultes de huit semaines ont été utilisées.
1. Configuration préopératoire
- Assurez-vous d’un stock approprié d’instruments chirurgicaux autoclavés et stérilisés, d’équipements, d’analgésiques et de médicaments anesthésiques.
- Assurez-vous d’un espace de travail adéquat sur une table d’opération.
- Préparez la table d’opération à l’aide d’une planche de mousse chirurgicale personnalisée recouverte de couches comme lit pour la souris. Fixez un coussin chauffant sur le panneau de mousse avec du ruban adhésif médical recouvert de gaze stérile.
- Créez des écarteurs en pliant une aiguille d’acupuncture à l’aide d’une pince vasculaire, en la pliant en deux, puis en pliant la pointe de l’aiguille d’acupuncture pliée en un crochet. Fixez une bande de caoutchouc à l’extrémité de l’aiguille d’acupuncture et utilisez une punaise pour fixer l’extrémité de la bande de caoutchouc sur le panneau de mousse.
- Calibrez le stéréomicroscope ; choisissez un stéréomicroscope avec une distance de mise au point adéquate. Couvrez les boutons de zoom/mise au point avec une feuille d’aluminium stérilisée pour permettre au chirurgien de les ajuster pendant l’opération. La feuille d’aluminium stérilisée a été placée sur les boutons zoom/focus, ce qui a permis au chirurgien de l’utiliser avec des gants stériles.
2. Anesthésie et préparation de
- la souris Pesez la souris et anesthésez-la en fonction de son poids corporel (isoflurane 3 %). Assurez-vous que la souris ne répond pas lorsque les espaces interdigitaux de sa patte sont pincés pour confirmer la profondeur de l’anesthésie. Une profondeur d’anesthésie adéquate doit être maintenue tout au long de la procédure (1 % d’isoflurane).
- Appliquez une pommade ophtalmique bilatérale sur les yeux pour prévenir l’irritation ou le dessèchement de la cornée pendant la chirurgie.
- Préparez le site chirurgical en rasant la fourrure du cou et de la poitrine à l’aide d’une tondeuse automatique. Retirez et nettoyez les cheveux lâches.
- Placez la souris en position couchée sur le coussin chauffant recouvert de gaze stérile. Maintenez la température de la souris à 37 °C pendant toute l’opération. Fixez la souris avec du ruban adhésif médical pour faire abducter les membres antérieurs horizontalement et empêcher les membres postérieurs et la queue de bouger. Un champ chirurgical jetable stérilisé avec une ouverture appropriée a été placé sur les souris.
3. Procédure opératoire
- Injecter du tramadol comme analgésie préventive (20 mg/kg, intrapéritonéale ou i.p.). Marquez l’incision transversale sur le bord supérieur de la clavicule. Utilisez trois cycles de gommages alternés de solution désinfectante à l’iodophore et d’éthanol pour désinfecter le site chirurgical. Confirmez la profondeur de l’anesthésie avec un pincement de l’orteil avant la chirurgie.
- En travaillant au microscope, faites une incision transversale de 4 mm le long de la marque à l’aide d’un scalpel stérile. Élargissez l’incision pendant la procédure si nécessaire.
- Disséquez brutalement à travers le fascia sous-cutané et identifiez le bord inférieur de la glande sous-mandibulaire. Tirez la glande sous-maxillaire vers le haut pour exposer la fosse supraclaviculaire et le sternum.
REMARQUE : Il peut y avoir des vaisseaux sanguins de petit calibre dans cette zone. L’électrocautérisation peut être utilisée pour arrêter les saignements. - Faites une incision partielle de sternotomie médiane (~4 mm) en incisant le sternum de la tête à la queue le long de la ligne médiane. Protégez la plèvre, le cœur et les vaisseaux sanguins pendant la sternotomie.
- Identifiez le muscle sterno-hyoïde. Tirez doucement le sternum à l’aide de deux petits écarteurs personnalisés faits d’aiguilles d’acupuncture et identifiez le muscle sterno-hyoïde, au-dessus de la trachée et de l’œsophage. Rétractez ce muscle pour exposer l’artère carotide, la veine jugulaire interne, le nerf phrénique, le nerf vague, la trachée et l’œsophage.
REMARQUE : Rétractez doucement le sternum pour éviter un pneumothorax ouvert. Contrairement à l’homme, l’œsophage de la souris n’est pas derrière la trachée, mais adjacent à la trachée du côté gauche. - Identifiez le plexus brachial gauche. Sur le bord latéral de la veine jugulaire interne gauche, tirez le fascia et le tissu adipeux vers l’extérieur pour exposer le plexus brachial. Recherchez le tronc supérieur, composé des nerfs cervicaux ou C5 et C6, qui ont trois branches. Identifiez le tronc moyen composé du nerf C7 et le tronc inférieur composé des nerfs C8 et thoracique ou T1, le long du tronc supérieur jusqu’à la queue de la souris.
REMARQUE : Il y a des vaisseaux sanguins longitudinaux à la surface du plexus brachial. Utilisez l’électrocautérisation pour éviter les saignements. Lors de la séparation du plexus brachial gauche, protégez le canal chyleux pour éviter une fistule chyleuse. - Prélevez le nerf C7 gauche. Disséquer la division antérieure et la division postérieure du tronc moyen (nerf C7) distalement jusqu’au niveau de la division à la corde sous la clavicule et bloquer le nerf C7 avec 0,1 mL de lidocaïne à 2 % par perfusion locale dans le tronc nerveux. Réséquez le nerf C7 avec des ciseaux à ressort Vannas à ses points de fusion avec le cordon latéral et le cordon postérieur. Coupez le nerf C7 de manière à ce que la longueur de chaque division soit similaire.
REMARQUE : Les divisions antérieure et postérieure du nerf C7 et les divisions antérieure et postérieure des troncs supérieur et inférieur parcourent une longue distance avant la confluence, de sorte que le nerf C7 doit être suffisamment libéré avant la résection. En fait, le nerf C7 n’est pas toujours divisé en deux divisions ; Parfois, il est divisé en trois divisions, voire en quatre dans de rares cas. - Retirez la lamina ventralis C6 gauche. Protégez soigneusement le nerf phrénique et sectionnez le muscle scalène antérieur au niveau du segment C6 pour exposer la racine nerveuse C7. Coupez de petites branches du nerf C7 innervant le muscle paraspinal avec des micropinces. Retirez doucement le nerf C7 et excisez soigneusement la lame ventrale C6.
REMARQUE : Il y a une proéminence osseuse entre la face médiale de l’artère carotide gauche et la face latérale de l’œsophage. Cette proéminence osseuse est la lamina ventralis de la 6e vertèbre cervicale. Le muscle longitudinal du bord latéral de la lamina ventralis C6 est le muscle scalène antérieur et le nerf phrénique passe à la surface du muscle scalène antérieur. - Prélevez le nerf C7 droit. Sectionner le muscle scalène antérieur du côté droit, semblable au côté gauche, et transecter la racine nerveuse droite C7 près du foramen intervertébral. Disséquez le nerf C7 droit à partir de son niveau de division.
REMARQUE : Coupez soigneusement le nerf C7 droit pour éviter d’endommager les vaisseaux sanguins sous le nerf. - Transférez le nerf C7 gauche.
- Retirez les longs corps musculaires à côté des corps vertébraux partiellement des deux côtés. Séparez et élargissez brutalement l’espace entre la trachée-œsophage et le corps vertébral.
- Envoyez une suture en nylon 5-0 semi-pliée du côté droit du corps vertébral vers le côté gauche par la voie préspinale.
- Attelez le nerf C7 gauche à l’aide d’un tube de perfusion et guidez le nerf vers le côté droit par la voie préspinale.
- Rétractez doucement la trachée et l’œsophage et adaptez les divisions antérieure et postérieure du nerf C7 gauche à la racine nerveuse C7 droite sans tension à l’aide de sutures en nylon 12-0. Suturez l’épineurium autour des nerfs avec 4 à 5 points de suture pour bien coapter les nerfs.
REMARQUE : Il est crucial de choisir un tube de perfusion en plastique d’épaisseur appropriée. Un tube trop mince pourrait endommager le nerf, et un tube trop épais pourrait endommager la trachée et l’œsophage. De plus, l’espace entre la trachée-œsophage et le corps vertébral est un espace en forme de « V », et la coupe d’une partie du longus colli musculaire peut raccourcir la voie de transfert.
4. Fermeture de la plaie
- Irriguez la plaie avec une solution saline normale stérile et séchez-la avec de la gaze stérile.
- Suturez le sternum et fermez la peau à l’aide de sutures monofilaments 5-0.
5. Soins postopératoires
- Attendez que la souris se réveille de l’anesthésie. Transférez la souris dans une cage propre sans matériau de litière, mais réchauffée avec une couverture chauffante. Observez la souris jusqu’à ce qu’elle soit ambulatoire. Utilisez le tramadol (20 mg/kg, i.p.) comme analgésie postopératoire.
- Placez les souris dans une cage de récupération et surveillez-la jusqu’à ce qu’elle se rétablisse. Restaurer l’eau et le régime alimentaire des souris après l’opération. Surveillez les souris après l’opération pour détecter des signes d’affaiblissement ou d’infection tous les jours, notamment la malnutrition, la posture voûtée et la fourrure ébouriffée. Deux semaines après l’opération, le retrait des sutures devrait avoir lieu.
REMARQUE : Appliquez la pommade à l’érythromycine sur la surface de la plaie tous les jours pendant trois jours consécutifs. - Si des complications, telles qu’un œdème de la plaie, sont observées, elles doivent être immédiatement résolues.