Visualisation de vésicules extracellulaires cyanobactériennes à l’aide de la microscopie électronique à transmission

Résumé

Source : Biller, S. J., et al. Isolement et caractérisation des vésicules extracellulaires cyanobactériennes. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo montre la préparation de vésicules extracellulaires cyanobactériennes pour la microscopie électronique à transmission par coloration négative, permettant une visualisation à haute résolution de la morphologie, de la taille et de la pureté des vésicules pour des analyses structurales et comparatives.

Protocole

1. Caractérisation des vésicules isolées

1. Effectuer une microscopie électronique à transmission de coloration négative (voir Tableau des matériaux) (TEM - microscopie électronique à transmission ; taille des particules, structure, pureté).
   1. Pour améliorer la qualité de l’image, décharge luminescente la surface d’une grille TEM précédemment revêtue à l’aide d’un système de décharge luminescente conformément aux directives du fabricant (voir le tableau des matériaux).
   2. Appliquez soigneusement ~5 μL de l’échantillon de vésicule et laissez reposer pendant 5 min.
      >REMARQUE : Les échantillons avec des concentrations de vésicules >10 9 ^mL-1 donneront généralement les meilleurs résultats ; les échantillons plus dilués auront peu de vésicules par image.
   3. Retirez l’échantillon en touchant le bord d’une grille sur un morceau de papier filtre propre.
   4. Pipetez une goutte de 20 à 50 μL d’acétate d’uranyle à 2 % (voir le tableau des matériaux) sur une surface plane recouverte d’un film plastique, et placez la grille flottant dessus pendant 2 min.
   5. Retirez l’acétate d’uranyle à l’aide de papier filtre et faites flotter brièvement sur une goutte d’eau ultrapure pour le laver. Répétez l’opération de lavage à l’eau une deuxième fois.
      REMARQUE : La grille sèche finale est prête à être visualisée après l’étape 1.1.5.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
2 % Solution d’acétate d’uranyle	Microscopie électronique Sciences	22400-2	Coloration négative - TEM
Carbon Support Film 200 Mesh, cuivre. CF200-Cu	Microscopie électronique Sciences	71150	Microscopie électronique à transmission (MET)
grille easiGlow Système de nettoyage à décharge lumineuse	Ted Pella	91000	Déchargeur commercial de lumière de grille TEM
Système de purification d’eau de référence Milli-Q Système de purification d’eau	Merck	Z00QSV0WW	pour l’obtention d’eau de qualité ultrapure de type I
Microscope électronique à transmission	JEOL	JEM-1400	Ou microscope similaire