Évaluation des interactions bactéries-cellules hôtes à l’aide de billes biomimétiques

Résumé

Source : Stones, D. H., et al. Matériaux biomimétiques pour caractériser les interactions bactéries-hôtes. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo démontre l’utilisation de billes bactériomimétiques pour quantifier l’adhésion bactérienne aux cellules épithéliales de l’hôte dans des conditions compétitives. Il décrit les étapes du traitement des cellules, de leur lyse et de l’enrobage des dilutions en série pour mesurer les unités formant des colonies.

Protocole

1. Mesure de l’adhérence bactérienne
   1. À des moments indiqués (par exemple, 1 heure après l’infection), retirez le milieu de la couche cellulaire.
   2. Lavez soigneusement la couche cellulaire avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) stérile et préchauffée (au moins 3-4 lavages de 1 ml de PBS chacun) pour éliminer toutes les cellules non attachées.
   3. Lyser les cellules hôtes en ajoutant 1 ml d’une solution stérile de Triton X-100 à 1 % v/v dans du PBS par puits. Incuber la plaque à 37 °C pendant 5 min.
   4. Pipetez chaque échantillon de haut en bas plusieurs fois avant de transférer le contenu de chaque puits dans des tubes séparés de 1,5 ml. Préparer des dilutions en série de 10 fois des échantillons dans du PBS stérile (p. ex., utiliser 100 ml d’échantillon et 900 ml de PBS).
   5. Plaquer 100 μl de chaque échantillon sur de la gélose marine Luria-Bertani (MLB) et étaler à l’aide d’un épandeur de cellules. Optimisez les dilutions à mettre en plaques en fonction des souches bactériennes et du point temporel.
      Remarque : Pour le dispositif expérimental décrit, des dilutions de 10⁵ ou 10⁶ fois donnent un nombre approprié d’unités formant colonies (UFC).
   6. Incuber des plaques à 37 °C O/N et dénombrer les bactéries par comptage des colonies.

Matériaux