Séparation des bactéries par quantité de capsule à l’aide d’un gradient de densité discontinu

Abstract

Source : Feltwell, T., et.al. Séparation des bactéries par quantité de capsules à l’aide d’un gradient de densité discontinu. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre l’utilisation d’un gradient de densité discontinu pour séparer les souches bactériennes en fonction de la quantité de capsules. En centrifugeant une banque de mutants transposons à travers le gradient, les bactéries avec des densités de capsule différentes se localisent dans des couches distinctes. Les fractions séparées peuvent ensuite être collectées pour une analyse en aval.

Protocol

1. Ajout de cellules préparées aux gradients et séparation par centrifugation

1. Ajoutez 600 μL de cellules préparées au sommet du gradient dans le tube très lentement et sans mélanger l’interface.
2. Placez les tubes dans des adaptateurs de tube et pesez les adaptateurs et les tubes combinés pour vous assurer qu’ils sont équilibrés.
   1. Place les adaptateurs de tube dans un rotor à angle fixe à l’intérieur d’une centrifugeuse de paillasse. Centrifugeuse pendant 30 min à 3 000 x g.
   2. Après la centrifugation, retirez soigneusement les tubes, placez-les dans un rack approprié et photographiez les résultats sou....

Materials