Une méthode visuelle sensible pour la détection des bactéries productrices de sulfure d’hydrogène

Résumé

Source : Zhu, W., & Chu, W. Méthode visuelle sensible pour la détection des bactéries productrices de sulfure d’hydrogène. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo présente une méthode visuelle sensible pour la détection rapide des bactéries productrices de sulfure d’hydrogène. Un changement de couleur du jaune au noir indique une activité bactérienne par la formation de sulfure de bismuth.

Protocole

1. Souches bactériennes

NOTE: Pour cette expérience, neuf souches standard ont été utilisées, soit Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris, et Klebsiella pneumoniae. Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa et Proteus vuigaris peuvent produire du H₂S.

1. Préparation de la culture bactérienne
   1. Transférer une colonie bactérienne de Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 et Klebsiella pneumoniae d’une plaque de gélose Luria-Bertani (LB) à 100 mL de milieu LB et cultiver à 37 °C pendant 12 à 16 h jusqu’à ce que la concentration bactérienne soit d’environ 1 x 10⁹ cellules/mL (comme indiqué par la DO₆₀₀ = 1).
   2. Transférez une colonie bactérienne de Fusobacterium nucleatum et de Proteus vuigaris à partir de plaques de gélose de bouillon de soja trypticase (TSB) dans 100 mL de milieu TSB et cultivez-les à 37 °C en anaérobie pendant 24 h jusqu’à ce que la concentration bactérienne soit d’environ 1 x 10⁹ cellules/mL (comme indiqué par DO₆₀₀ = 1).

2. Essai de détection H₂S

1. Essai de production de sulfure d’hydrogène
   1. Mélanger 100 μL de culture bactérienne avec 100 μL de solution de bismuth nouvellement préparée (pH 8,0 ; 10 mM de chlorure de bismuth (III), 0,4 M de triéthanolamine-HCl, 20 mM de pyridoxal 5-phosphate monohydraté, 20 mM d’EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique) et 40 mM de L-cystéine) dans les plaques de microtitration à 96 puits et cultiver pendant 20 min à 37 °C. Pour chaque souche bactérienne, effectuez l’analyse en trois exemplaires.
   2. Après 20 min, vérifiez le changement de couleur. Si la couleur de la solution passe du jaune clair au noir, cela indique que la bactérie est capable de produire H₂S. Répétez cette mesure 3 fois.
2. Sensibilité de la méthode
   1. Déterminer la sensibilité de la méthode à l’aide de différentes concentrations d’hydrosulfure de sodium (NaHS) : 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM et 0 mM, mélangés à une solution de sulfure de bismuth.
   2. Déterminer la présence de HS⁻/S²⁻ en observant la formation d’un précipité noir BS. Évaluez la couleur des puits à l’aide d’une échelle visuelle allant de l’absence de production de couleur (-) à la production de couleur noire la plus foncée (++++++).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Chlorure de bismuth (III)	Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd	7787-60-2
EDTA	Nanjing Chemical Reagent Co., Ltd	60-00-4
Fusobacterium nucleatum	ATCC	25586
L-cystéine	Amresco	52-90-4
Triéthanolamine-HCl	Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.	637-39-8
Hydrosulfure de sodium
Pipette