Un nouveau milieu chromogène pour la détection rapide des espèces de Vibrio

Résumé

Source : Yeung, M., et al. Mise au point d’un milieu gélaire chromogène plus sensible et plus spécifique pour la détection de Vibrio parahaemolyticus et d’autres espèces de Vibrio . J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo présente une méthode basée sur la culture pour identifier les espèces de Vibrio , mettant en évidence la gélose chromogène comme une alternative plus précise à la gélose thiosulfate-citrate-sels biliaires-saccharose ou TCBS couramment utilisée. La gélose chromogène permet une différenciation supérieure des souches de Vibrio en détectant les activités enzymatiques spécifiques à l’espèce.

Protocole

Croissance sur supports sélectifs et différentiels

1. Deux à quatre jours avant l’expérience, striez toutes les souches microbiennes sur un milieu non sélectif (TSAS, BHI ou gélose au chocolat) pour isoler la colonie. Incuber les plaques à 35-37 °C pendant 48 heures. Vérifiez la pureté des cultures en observant la morphologie de la colonie après l’incubation. Les cultures pures devraient produire des colonies qui présentent une morphologie de colonie similaire.
2. Transférez quelques colonies isolées dans 5 ml de bouillon. Incuber les tubes à 35-37 °C pendant 16-24 heures.

NOTE: Utilisez de jeunes colonies, qui ont moins de quatre jours, pour préparer des cultures de nuit dans toutes les expériences.

3. Traînée d’une boucle de cultures nocturnes sur des milieux sélectifs et différentiels (TCBS et gélose chromogène) pour l’isolement de la colonie. Incuber les plaques à 35-37 °C jusqu’à 96 heures.
4. Enregistrez la croissance globale de toutes les souches en examinant à la fois la densité de culture sur la plaque et la taille des colonies isolées. Enregistrez la couleur des colonies sous la lumière ambiante et/ou UV. Notez d’autres caractéristiques de la colonie isolée, telles que l’altitude, la marge et la forme.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactif/Équipement
Agar-agar	Fisher Scientific	Référence : DF0140-15-4	peut utiliser d’autres marques
BHI en poudre	Fisher Scientific	Référence : DF0418-17-7	peut utiliser d’autres marques
Générateur de gaz CampyGen	Hardy Diagnostics	Réf. N° CN035A	pour créer une atmosphère microaérophile ; peut utiliser d’autres marques
Assiettes d’agar au chocolat	Hardy Diagnostics	E14	peut utiliser d’autres marques
Tubes de culture	Fisher Scientific	Réf. S50712	peut utiliser d’autres marques
Plaques de gélose HardyChrom Vibrio	Hardy Diagnostics	G319	Cette étude évalue ce support
Incubateur	Quelconque
Anses d’inoculation	Fisher Scientific	22-363-606	Une taille de 10 microlitres a été utilisée dans cette étude
Pétri	Fisher Scientific	FB0875713	peut utiliser d’autres marques
Pipette et pointes	Tous les embouts stérilisés
Poudre TCBS	Hardy Diagnostics	265020	Cette étude évalue ce support
Poudre TSB	Fisher Scientific	Référence : DF0370-07-5	peut utiliser d’autres marques
Armoire de visualisation UV	Quelconque		Émettre une lumière UV à ondes longues
Bain-marie	Quelconque
Espèces et souches bactériennes
Aeromonas hydrophila	ATCC
Candida albicans	ATCC
Campylobacter jejuni	ATCC
Escherichia coli	ATCC
Proteus mirabilis	ATCC
Pseudomonas aeruginosa	ATCC
Staphylococcus aureus	ATCC
Salmonella Choleraesuis	ATCC
Shigella boydii	ATCC
Shigella flexneri	ATCC
Shigella sonnei	ATCC
Vibrio alginolyticus	ATCC
V. cholerae (les sérotypes comprennent les biovars O139, O1, non O1, El Tor)	FDA, ATCC
V. damsela	FDA
V. fisheri	Environnement
V. fluvialis	CDC
V. furnissii	CDC
V. hollisae	FDA
V. metschnikovii	ATCC
V. mimicus	FDA
V. parahaemolyticus (les sérotypes comprennent O3 :K6, O1 :K56, O4 :K8, O5 :K15, O8, etc.)	ATCC, FDA, CDC, Environnement
V. proteolyticus	FDA
V. vulnificus	FDA