Essai d’inondation des semis pour le dépistage de la résistance bactérienne des tomates

Résumé

Source : Hassan, J. A., et al. Identification à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae pv. Tomate dans la tomate à l’aide d’un test d’inondation de semis. J. Vis. Exp. (2020).

Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de dépistage de la résistance bactérienne dans différentes souches de tomates à l’aide de semis âgés de dix jours inoculés avec une suspension bactérienne. Il explique comment les bactéries envahissent les stomates, délivrent des protéines effectrices pour supprimer l’immunité des plantes et comment les réponses des plantes diffèrent entre les souches sensibles et résistantes. Le résultat est évalué en observant des différences de croissance visibles, les plantes résistantes restant saines et les plantes sensibles présentant des lésions tissulaires.

Protocole

1. Méthode d’inondation des plants de tomates

1. Sortez les plaques avec les semis de 10 jours de la chambre de croissance et mettez-les dans l’enceinte de biosécurité pour préparer les plaques aux inondations.
2. Retirez le ruban chirurgical de deux plaques.
3. Réglez une minuterie sur 3 min. Mesurer 6 mL de l’inoculum final de P. syringae pv. tomate (Pst) (Pst19 OD₆₀₀ = 0,0075 ou PstDC3000 OD₆₀₀ = 0,005) et transférer 6 mL d’inoculum dans chaque assiette avec les plantules de 10 jours.
4. Enfoncez doucement les plantules dans l’inoculum à l’aide d’une pointe de pipette stérile. Démarrez le minuteur.
5. Tenez une assiette dans chaque main. Inclinez l’avant de la plaque vers le bas pour accumuler l’inoculum et immerger principalement les cotylédons et les feuilles des plantules.
6. Agitez d’un côté à l’autre 5 à 7 fois, puis inclinez les plaques vers l’arrière pour couvrir les racines et toute l’assiette.
7. Inclinez à nouveau les plaques vers le bas pour immerger les cotylédons et les feuilles, et répétez l’opération pendant un total de 3 minutes.
8. Versez l’inoculum des plaques, posez les plaques sur une surface plane, puis videz l’inoculum résiduel une deuxième fois.
9. Enroulez à nouveau les plaques avec du ruban chirurgical et répétez les étapes 1.2 à 1.8 pour les plaques restantes.
10. Réincubez les plaques dans la chambre de croissance après que toutes les plaques ont été inondées.

Phénotype après 7 à 10 jours pour la PstDC3000 ou 10 à 14 jours pour la Pst19.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Enceinte de biosécurité, classe II type A2
Cuvettes jetables en plastique, polystyrène	VWR International	47744-642
Chenille Kraft Bois Plat Cure-dents	VWR International	500029-808
Mèche de brûleur à alcool en verre	Fisher Scientific	S41898A / Non. W-125
Brûleurs à alcool en verre	Fisher Scientific	S41898 / N° BO125
Réactif Glycérol ACS	VWR International	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Essuie-glaces à tâche délicate	Fisher Scientific	N° 06-666-A
Chlorure de magnésium, grade ACS	VWR International	97061-356
Sulfate de magnésium heptahydraté, grade ACS	VWR International	97062-130
Tubes de microcentrifugation, 1,5 mL
Tubes de microcentrifugation, 2,2 mL
Murashige & Skoog, sels de base	Laboratoires Caisson, Inc.	MSP01-50LT
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 20-200uL	Rainin	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 2-20uL	Rainin	L8-20XLS
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 100 mm x 25 mm	VWR International	89107-632
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 150 mm x 15 mm	Fisher Scientific	Référence : FB08-757-14
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 150x15mm	Fisher Scientific	08-757-148
Pointes LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	Rainin	17005091
Pointes LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	Rainin	17005093