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Article de méthode

Essai d’inondation des semis pour le dépistage de la résistance bactérienne des tomates

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26 septembre 2025

Dans cet article

Résumé

Source : Hassan, J. A., et al. Identification à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae pv. Tomate dans la tomate à l’aide d’un test d’inondation de semis. J. Vis. Exp. (2020).

Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de dépistage de la résistance bactérienne dans différentes souches de tomates à l’aide de semis âgés de dix jours inoculés avec une suspension bactérienne. Il explique comment les bactéries envahissent les stomates, délivrent des protéines effectrices pour supprimer l’immunité des plantes et comment les réponses des plantes diffèrent entre les souches sensibles et résistantes. Le résultat est évalué en observant des différences de croissance visibles, les plantes résistantes restant saines et les plantes sensibles présentant des lésions tissulaires.

Protocole

1. Méthode d’inondation des plants de tomates

  1. Sortez les plaques avec les semis de 10 jours de la chambre de croissance et mettez-les dans l’enceinte de biosécurité pour préparer les plaques aux inondations.
  2. Retirez le ruban chirurgical de deux plaques.
  3. Réglez une minuterie sur 3 min. Mesurer 6 mL de l’inoculum final de P. syringae pv. tomate (Pst) (Pst19 OD600 = 0,0075 ou PstDC3000 OD600 = 0,005) et transférer 6 mL d’inoculum dans chaque assiette avec les plantules de 10 jours.
  4. Enfoncez doucement les plantules dans l’inoculum à l’aide d’une pointe de pipette stérile. Démarrez le minuteur.
  5. Tenez une assiette dans chaque main. Inclinez l’avant de la plaque vers le bas pour accumuler l’inoculum et immerger principalement les cotylédons et les feuilles des plantules.
  6. Agitez d’un côté à l’autre 5 à 7 fois, puis inclinez les plaques vers l’arrière pour couvrir les racines et toute l’assiette.
  7. Inclinez à nouveau les plaques vers le bas pour immerger les cotylédons et les feuilles, et répétez l’opération pendant un total de 3 minutes.
  8. Versez l’inoculum des plaques, posez les plaques sur une surface plane, puis videz l’inoculum résiduel une deuxième fois.
  9. Enroulez à nouveau les plaques avec du ruban chirurgical et répétez les étapes 1.2 à 1.8 pour les plaques restantes.
  10. Réincubez les plaques dans la chambre de croissance après que toutes les plaques ont été inondées.

Phénotype après 7 à 10 jours pour la PstDC3000 ou 10 à 14 jours pour la Pst19.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Enceinte de biosécurité, classe II type A2   
Cuvettes jetables en plastique, polystyrèneVWR International47744-642 
Chenille Kraft Bois Plat Cure-dentsVWR International500029-808 
Mèche de brûleur à alcool en verreFisher ScientificS41898A / Non. W-125 
Brûleurs à alcool en verreFisher ScientificS41898 / N° BO125 
Réactif Glycérol ACSVWR InternationalEMGX0185-5 
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ Essuie-glaces à tâche délicateFisher ScientificN° 06-666-A 
Chlorure de magnésium, grade ACSVWR International97061-356 
Sulfate de magnésium heptahydraté, grade ACSVWR International97062-130 
Tubes de microcentrifugation, 1,5 mL   
Tubes de microcentrifugation, 2,2 mL   
Murashige & Skoog, sels de baseLaboratoires Caisson, Inc.MSP01-50LT 
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 20-200uLRaininL8-200XLS 
Pipet-Lite XLS LTS 8-CH Pipette 2-20uLRaininL8-20XLS 
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 100 mm x 25 mmVWR International89107-632 
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 150 mm x 15 mmFisher ScientificRéférence : FB08-757-14 
Boîte de Pétri stérile en polystyrène 150x15mmFisher Scientific08-757-148 
Pointes LTS 20 μL 960/10 GPS-L10Rainin17005091 
Pointes LTS 250 μL 960/10 GPS-L250Rainin17005093 

Étiquettes

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