Précipitation de calcite induite par Sporosarcina pasteurii

Résumé

Source : Bhaduri, S., et al., Précipitation de calcite induite par des facteurs microbiologiques médiée par Sporosarcina pasteurii. J . Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo démontre la méthode d’enrichissement de Sporosarcina pasteurii avec de l’urée et du chlorure de calcium pour déclencher l’activité de l’uréase, conduisant à la formation de cristaux de calcite visibles par précipitation de calcite induite par voie microbiologique, ou MICP.

Protocole

1. Protocole d’enrichissement en éléments nutritifs pour accélérer les précipitations

1. Transférez 9 ml du liquide de culture préparé (cellules + milieu) dans plusieurs tubes à centrifuger stérilisés, chacun d’un volume de 10 ml.
2. Préparer une solution mère de 100 ml de l’enrichissement externe composée de quatre composants aux concentrations suivantes dans un milieu frais : Urée : 2 g/L, Chlorure d’ammonium : 1 g/L, Bicarbonate de sodium : 212 mg/L, Chlorure de calcium : 280 mg/L. Mesurer soigneusement tous les ingrédients à l’aide d’une balance analytique et mélanger tous les ingrédients sauf l’urée avec le milieu frais dans un bécher et placer dans l’autoclave (121 °C, 15 psi, 15 min).
   1. Après l’autoclave, mélanger la quantité requise d’urée (2 mg) avec 1 ml de milieu frais et la passer dans une seringue équipée d’un filtre à seringue de 0,22 μm pour terminer le processus d’enrichissement.
   2. Ajouter 1 ml de ce milieu d’enrichissement avec des additifs dans les tubes à centrifuger stérilisés contenant 9 ml du liquide de culture préparé (cellules + milieu).
      NOTE: L’urée, étant dégradable à des températures élevées, ne peut pas être stérilisée dans un autoclave. Ainsi, après que les autres composants ont été autoclavés (121 °C, 15 psi, 15 min), l’urée est ajoutée en dernier à travers un filtre à seringue de 0,22 μm.
3. Vortex soigneusement chaque tube à l’aide d’un vortex mécanique. Placez les liquides enrichis (cellules + milieu + additifs) dans un incubateur non agitateur à 30 °C. Surveillez régulièrement toutes les unités pour l’initiation des précipitations. À l’aide d’un microscope optique, commencer les observations microscopiques une fois que le début des précipitations est détecté à l’œil nu. C’est généralement entre 30 et 36 heures après le début des expériences.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Flacons en pyrex	Fisher Scientific	Réf. S63268	Corning Erlenmeyer
Cylindre doseur	Cole-Parmer	CP08559GC	Cylindre gradué Cole-Parmer de classe A avec Cal Cert,TC ; 1000 mL,1/paquet
Balance analytique	OHAUS	AX124E	Utilisé pour mesurer le poids des réactifs
Autoclave	Brinkmann	58619000
Ruban autoclave	VWR	52428864
Aluminium	Sigma-Aldrich	Z185140	Utilisé pour sceller le ballon avant de le placer dans l’autoclave
Stock bactérien	Cedarlane	11859	-80°C stock de S. pasteurii, n° ATCC est mentionné contre Cat. Non.
Pipettes mécaniques monocanaux Mline, volume variable	Biohit	725010	Commercialisé par VWR sous le numéro de catalogue 14005976
Pointe de micropipette	Fisher Scientific	Référence 212772B	Utilisé pour gratter les plaques de gélose
Incubateur	Relieur	80079098	Incubateur de microbiologie, série BF
Incubateur à secousses	VWR	14004300	Incubateurs à secousses de paillasse VWR Signature
Parafilm	Sigma-Aldrich	Réf. P7793	Utilisé pour sceller les plaques d’agar
Urée	Sigma-Aldrich	U1250	Enrichissement pour milieu nutritif
Bicarbonate de sodium	Sigma-Aldrich	S8875	Enrichissement pour milieu nutritif
Chlorure de calcium	Sigma-Aldrich	Réf. C1016	Enrichissement pour milieu nutritif