Préparation des sphéroplastes d’E. coli

Résumé

Source : Figueroa, D. M., et.al. Production et visualisation de sphéroplastes et protoplastes bactériens pour caractériser la localisation des peptides antimicrobiens. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo démontre la production de sphéroplastes d’Escherichia coli en inhibant d’abord la division cellulaire pour induire la filamentation, suivie d’une digestion enzymatique de la paroi cellulaire. Le processus comprend l’ajout contrôlé d’un agent chélateur, la DNase, et d’un stabilisateur osmotique pour assurer la formation correcte du sphéroplaste et la stabilité pour l’observation microscopique.

Protocole

1. Préparation de la solution

1. Préparez 1 M de Tris-Cl, pH 7,8 en dissolvant 10,34 g de Tris HCl et 4,17 g de Tris OH dans 50 mL de dH₂O dans une fiole de 125 mL. Stériliser en filtrant à travers un filtre à seringue de 25 mm avec une membrane de 0,2 μm et conserver dans un tube conique à température ambiante.
2. Préparer la solution A (20 mM de MgCl₂, 0,7 M de saccharose, 10 mM de Tris-Cl, pH 7,8) en dissolvant 0,10 g de MgCl₂ (95,2 g/mol) et 11,98 g de saccharose (342,3 g/mol) dans 25 mL de_dH2O dans une fiole de 125 mL. Ajouter 500 μL 1 M de Tris-Cl (pH 7,8) et ajuster le volume à 50 mL. Stériliser en filtrant à....

Résultats

Figure 1 : Images représentatives d’E . coli. (A) la bactérie E. coli , (B) le serpent E. coli et (C) le sphéroplaste d’E. coli . Le.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Trizma hydrocloride (Tris HCl)	Sigma	Réf. T3253
Trizma base (Tris OH)	Sigma	Réf. T1503
Chlorure de magnésium	Sigma	Référence M8266
Saccharose	Sigma	S7903
Lysozyme	Sigma	L6876
Désoxyribonucléase I	Sigma	D4527
Acide éthylènediaminetétraacétique	Sigma	106361	Utilisation de Sigma 106361 dans le développement du protocole original ; 106361 abandonné avec ED2SS en remplacement
Hydrate de céphalexine	Sigma	Réf. C4895
BBL Trypticase bouillon de soja	Fisher Scientific	Réf. B11768
Filtre à seringue Acrodisc 25 mm avec membrane HT Tuffryn de 0,2 μm	Pall Corporation	4192