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1. Préparer des instruments, des milieux de culture, des solutions et des boîtes de Pétri
1. Autoclavez les cure-dents dans un bécher de 50 ml recouvert de papier d’aluminium pour les garder stériles.
2. Stérilisez tous les produits secs qui seront utilisés (pointes, bâtonnets, verrerie, etc.) dans un autoclave.
NOTE: Prudence! Suivez toutes les consignes de sécurité pour le modèle d’autoclave utilisé. Les autoclaves présentent un risque d’explosion, de brûlures dues à la vapeur et de contact avec des surfaces, des matériaux et des fluides chauds.
3. Préparez l’agar-agar MS (farine de soja Mannitol (SFM)) pour faire pousser des cultures.
1. Ajouter 5 g de farine de soja et 5 g d’agar-agar dans une fiole de 1 L.
2. Dissoudre 5 g de mannitol dans 250 mL d’eau du robinet et verser dans la fiole contenant la farine de soja et l’agar.
3. Ajoutez un bouchon en mousse et une feuille d’aluminium à l’ouverture du ballon et de l’autoclave à 121 °C, 15 psi pendant au moins 30 min.
PRUDENCE: Ce milieu déborde facilement. Utilisez un flacon qui peut contenir au moins quatre fois le volume réel de gélose MS autoclave. Un autocuiseur standard peut être utilisé à la place d’un autoclave avec des considérations de sécurité similaires. Alternativement, un four à micro-ondes peut être utilisé pour stériliser les milieux et les matériaux si l’accès à un autoclave n’est pas possible. Les enseignants du secondaire peuvent également vouloir collaborer avec les collèges ou les universités locaux pour accéder aux fournitures autoclavées.
4. Refroidissez le support jusqu’à ce qu’il soit suffisamment confortable pour être manipulé. Attention à ne pas le refroidir trop longtemps car la gélose se solidifie à des températures inférieures à 50 °C.
5. Verser la gélose MS de la fiole dans des boîtes de Pétri stériles jusqu’à ce que le fond de chaque boîte de Pétri soit à moitié rempli (environ 25 ml de milieu par boîte de Pétri). Laisser solidifier avant d’utiliser des plaques de gélose. Conservez les plaques de gélose dans un sac en plastique à température ambiante jusqu’à ce que vous en ayez besoin.
NOTE: Les plaques de gélose peuvent également être conservées dans un réfrigérateur, surtout si des antibiotiques sont nécessaires dans les milieux.
2. Étalez des streptomyces sur des plaques pour la propagation
1. Étalez des souches de Streptomyces sur des plaques de gélose MS en colonies uniques à l’aide d’une méthode standard, telle que la méthode des traînées de quadrants.
NOTE: Une anse d’inoculation ou des cure-dents stériles peuvent être utilisés. Facultatif : D’autres milieux sont couramment utilisés pour les espèces de Streptomyces , tels que R2YE et les milieux minimaux.
2. Incuber les plaques à 30 °C.
3. Faites reposer les plaques en cueillant une seule colonie tous les 4 à 6 jours. Au fur et à mesure que les colonies vieillissent, elles deviennent sujettes à des mutations aléatoires.
3. Comparez et enregistrez l’apparence visuelle
1. Prenez note de la morphologie de la colonie pour chaque mutant par rapport à la souche parentale de type sauvage après avoir strié toutes les souches comme à l’étape 2. Comparez le nouvel isolat à celui d’une espèce bien étudiée, comme S. coelicolor ou S. venezuelae, lors de la caractérisation de nouvelles espèces de Streptomyces . Notez les caractéristiques (figure 1) telles que la forme de base, la surface de la colonie (duveteuse, chauve, ridée, etc.), l’opacité, l’élévation et la pigmentation (distinguer le mycélium végétatif, le mycélium aérien et/ou le milieu environnant).
2. Étiquetez une plaque de gélose MS et striez les souches de type sauvage et mutantes en coin (figure 1). Veillez à ce qu’aucune souche ne touche une autre souche pour éviter la contamination croisée. Notez la date et l’heure auxquelles les souches sont striées sur la plaque. Incuber les plaques à 30 °C.
3. Placez des boîtes de Pétri cultivées sur du papier coloré ou blanc pour homogénéiser l’arrière-plan. Écrivez sur le papier le nom de la souche, la date, la température d’incubation et le temps écoulé depuis la première traînée de plaques. Prenez une ou plusieurs photos numériques de la plaque avec ces dernières informations écrites sur le fond de papier afin de minimiser la confusion.
NOTE: L’écriture peut être recadrée à partir de la photographie ultérieurement si elle doit être utilisée pour la préparation de figures.
