Visualisation de la motilité bactérienne à l’aide d’un milieu semi-solide enrichi en colorant redox

Résumé

Source : Chu, W., et Zhuang, X. Visualisation de la motilité bactérienne sur la base d’une réaction de couleur. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo fait la démonstration d’un essai de gélose semi-solide à base de colorant redox pour évaluer la motilité bactérienne en distinguant visuellement les souches mobiles et non mobiles.

Protocole

Souches bactériennes

NOTE: Quatre-vingts souches ont été isolées dans le milieu aquatique et identifiées à l’aide d’un instrument automatisé d’identification des bactéries (voir le tableau des matières), notamment Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae et Aeromonas hydrophila (tableau 1). Staphylococcus aureus (voir la table des matières) a été utilisé comme témoin négatif non mobile ; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Salmonella typhimurium (voir le tableau des matières) ont été utilisés comme souches témoins positives.

1. Identifier les souches bactériennes d’essai à utiliser pour l’analyse de la motilité.
2. Inclure les témoins négatifs non mobiles et les souches de contrôle positives mobiles.

Observation de la motilité bactérienne améliorée par TTC

1. Prélever des colonies uniques de bactéries d’essai sur des plaques de gélose et les inoculer dans le milieu semi-solide avec du TTC (chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium) en les perforant avec des aiguilles d’inoculation.
2. Cultivez les tubes à 37 °C dans l’incubateur pendant 24 à 48 h pour observer les résultats.
3. Observer l’état de croissance : caractériser la bactérie comme non mobile (-) si seule la ligne de ponction est rouge. Caractérisez la bactérie comme mobile (+) si la couleur rouge s’étend légèrement vers l’extérieur le long de la ligne de perforation.

Tableau 1 : Comparaison de la motilité bactérienne.

Filtrer		Milieu semi-solide avec 0,4 % de gélose		Milieu semi-solide avec 0,4 % de gélose et 0,005 % de TTC
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Les nombres indiquent le nombre de déformations positives (+) et de taches négatives (-).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bacto Agar	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	Contrôle positif
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Contrôle positif
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	Contrôle non mobile négatif
Tryptose	OXOÏDE
TTC (chlorure de 2,3,5-triphényl-tétrazolium)	Sigma	298-96-4
Système automatisé d’identification microbienne VITEK 2	Biographie Mérieux