Structuration microfluidique et suivi par fluorescence de la croissance bactérienne unicellulaire

Abstract

Source : Pioli, R., et al., Structuration des micro-organismes et des microparticules par assemblage séquentiel assisté par capillarité. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo montre la méthode de capture de cellules uniques d’Escherichia coli (E. coli) marquées par fluorescence dans des pièges microfluidiques à l’aide d’une suspension sans carbone et d’un flux contrôlé, suivi d’un ajout de nutriments pour déclencher la croissance et d’une imagerie par fluorescence des microcolonies.

Protocol

1. Motifs bactériens

1. Un jour avant l’expérience, faire croître une population d’Escherichia coli (souche MG1655 prpsM-GFP). Inoculer la culture directement à partir du stock congelé et faire croître pendant une nuit pendant 20 h dans un milieu de bouillon de lysogénie (LB) dans un incubateur à agitateur à 37 °C. Ajouter 50 μg/mL de kanamycine pour que les cellules conservent le plasmide prpsM-GFP (protéine fluorescente verte).
2. Le jour de l’expérience, réglez l’incubateur à 37 °C (figure 1A) plusieurs heures avant l’expérience pour assurer une température uniforme et stable avant de commencer. Ensuite, installez le pousse-seringue....

Results

Figure 1 : Schéma de la plate-forme pour l’assemblage séquentiel assisté par capillarité dans un canal microfluidique. (A) Incubateur de boîtes. L’incubateur à boîte maintient une température uniforme et constante (ici, 30 °C) à l’intérieur .......

Materials