Visualisation des interactions bactériennes unicellulaires

Résumé

Source : Yarringto, K. D., et al. Visualisation cinétique des interactions bactériennes unicellulaires interespèces. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo montre la préparation d’un système de coculture utilisant des bactéries mobiles et non mobiles sous un tampon d’agarose pour l’imagerie de cellules vivantes. Il montre comment les bactéries mobiles détectent les attractifs chimiques et envahissent les colonies non mobiles, révélant ainsi les interactions bactériennes.

Protocole

1. Préparation des cellules bactériennes et des tampons d’inoculation

1. Mesurer la densité optique, OD₆₀₀, de chaque sous-culture et diluer Pseudomonas aeruginosa à une DO₆₀₀ = 0,03 et Staphylococcus aureus à une DO₆₀₀ = 0,10 dans M8T (Minimal Medium 8 + tryptone) préchauffé à 37 °C. Mélanger P. aeruginosa et S. aureus dans un rapport de 1:1 et vortex.
   NOTE: Si les souches nécessitent des antibiotiques, ils peuvent être ajoutés à la culture pendant la nuit et à la sous-culture, mais ils ne doivent pas être ajoutés lors du mélange des espèces pour l’imagerie s’ils affectent les autres espèces de la coculture. La stabilité du plasmide et les effets des antibiotiques sur toutes les espèces de la coculture devront être déterminés pour chaque organisme ou plasmide utilisé.
2. Pipeter 1 μL de coculture uniformément au fond d’une boîte en verre stérile préchauffée de 35 mm.
3. Retirez la découpe en silicone du moule à l’aide d’une pince à épiler stérile.
4. Retirez le tampon du plat à l’aide de spatules stériles.
   1. Glissez la spatule légèrement pliée sous le bord du tampon tout en tenant le moule à l’envers pour le déposer sur un couvercle de plaque de Petri stérile.
      NOTE: Ne forcez pas le tampon, sinon il se déchirera. Gardez une trace de quel côté du coussin se trouve le bas.
5. Transférez le tampon dans la boîte contenant les cellules bactériennes, le fond vers le bas, en glissant la spatule inclinée à 90° sous le tampon et en la plaçant sur la lamelle inoculée. À l’aide de la spatule inclinée à 90°, faites en sorte que le tampon affleure la lamelle et appuyez doucement sur les bulles d’air.
6. Enlevez l’excès d’humidité des lingettes humides et placez-les sur le bord du plat, en vous assurant qu’elles ne touchent pas le tampon. L’échantillon est maintenant prêt pour l’imagerie.

Matériaux