Préparation de la culture de Salmonella typhimurium

Résumé

Source : Gutiérrez, S., et al., Isolement des phagosomes contenant Salmonella typhimurium à partir de macrophages. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre la culture et la préparation de Salmonella typhimurium pour obtenir une suspension bactérienne propre et métaboliquement active adaptée à une utilisation expérimentale.

Protocole

Toutes les étapes impliquant l’utilisation de Salmonella typhimurium pathogène doivent être effectuées dans une installation de niveau de sécurité biologique BSL-2 (niveau de biosécurité 2) ou de niveau de sécurité biologique supérieur.

1. Culture de Salmonella typhimurium

1. Inoculer Salmonella typhimurium (souche SL1344) d’une seule colonie bactérienne dans 5 mL de bouillon de perfusion cerveau-cœur (BHI) à l’aide d’une anse bactérienne.
2. Incuber la suspension bactérienne dans un incubateur à 37 °C pendant la nuit en secouant.
3. Le lendemain, transvaser 1 mL de suspension bactérienne dans 19 mL de bouillon BHI dans une fiole conique et incuber à 37 °C dans un incubateur en agitant.
4. Surveillez la croissance de S. typhimurium en mesurant la densité optique (DO) à 600 nm (OD₆₀₀) à l’aide d’un spectrophotomètre. Les mesures doivent être prises environ toutes les 30 minutes.
5. Lorsque la DO₆₀₀ atteint 1,0, retirez la suspension bactérienne de l’incubateur et transférez-la dans un tube de 50 ml. Centrifuger les bactéries à 5 400 x g pendant 15 min à 4 °C.
6. Retirer le surnageant et le remettre en suspension dans 10 mL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) stérile.
7. Centrifugeuse à 5 400 x g pendant 15 min à 4 °C.
8. Retirer le surnageant et remettre les bactéries en suspension dans 4,9 mL de PBS stérile.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
MgCl₂	Carl Roth	Réf. A537.4
Saccharose	Carl Roth	4621.1
Mannitol	Carl Roth	4175.1
Spectrophotomètre SmartSpec 3000	Bio-Rad	170-2501
Boucle bactérienne (10μl)	Sarstedt	86.1562.010
Salmonella enterica sérovar Typhimurium Réf. SL1344	Institut Leibniz DSMZ-Collection allemande de micro-organismes et de cultures cellulaires
PBS (solution saline tamponnée au phosphate)	Biochrom	L1825