Préparation d’une culture de Streptococcus mitis pour des études d’interaction hôte-pathogène

Résumé

Source : Naji, A., et al. Étude du stress oxydatif causé par les streptocoques du groupe Mitis chez Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo montre la méthode de culture de Streptococcus mitis dans des conditions microaérophiles à l’aide d’extrait de levure Todd-Hewitt, ou milieu gélosé THY, pour préparer des cultures bactériennes pour les études d’interaction hôte-pathogène.

Protocole

1. Préparation des streptocoques du groupe Mitis pour l’infection

1. Épluchez les souches souhaitées de streptocoques sur la gélose THY (Todd-Hewitt Yeast Extract) de 100 mm x 15 mm (si les plaques ont été stockées à 4 °C, préchauffez les plaques à 37 °C avant de strier les souches respectives), puis incubez les plaques à 37 °C pendant la nuit (~18 h) dans un bocal à bougie offrant un environnement microaérophile pour la croissance des streptocoques (les plaques striées peuvent être stockées pendant une semaine à 4 ° C).
2. Pour propager des isolats cliniques de streptocoques, utilisez de la gélose tryptique au sang de soja. Incuber les plaques à 37 °C dans un photophore pendant la nuit (~18 h).
3. Le lendemain, retirez les assiettes du pot à bougie et choisissez les colonies isolées à l’aide d’une boucle stérile. Inoculer des tubes coniques stériles de 15 mL contenant 2 mL de bouillon THY. Pour propager des isolats cliniques de streptocoques, complétez le bouillon THY avec 5 % v/v de sang de mouton. Fermez bien les bouchons et incubez les tubes à 37 °C dans des conditions statiques.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
BD Bacto Bouillon Todd Hewitt	Fisher Scientific	Référence : DF0492-17-6
Extrait de levure	Fisher Scientific	Réf. BP1422-500
Pipettes sérologiques jetables en polystyrène 10 mL	Fisher Scientific	07-200-574
Pipettes sérologiques jetables en polystyrène 25 mL	Fisher Scientific	07-200-575
Boîtes de Pétri bactériologiques Falcon avec couvercle (35 mm x 10 mm)	Fisher Scientific	Référence 08-757-100A
Boîte de Pétri avec couvercle transparent (60 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875713A
Boîtes de Pétri avec couvercle transparent (100 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875712
S. mitis ATCC 49456
Agar-agar