Culture d’Haemophilus influenzae non typable

Résumé

Source : Venuprasad, K. et. al., Administration intra-trachéale d’Haemophilus influenzae dans des modèles murins pour étudier l’inflammation des voies respiratoires. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo montre la culture d’Haemophilus influenzae non typable et la préparation d’un inoculum à dose normalisée pour les études de colonisation ou d’infection en aval.

Protocole

1. Culture d’Haemophilus influenzae non typable (NTHi) et préparation de l’inoculum

1. Dressez NTHi sur une plaque de gélose au chocolat et maintenez la plaque à l’envers dans un incubateur de CO₂ humidifié pendant la nuit à 37 °C et 5 % de CO₂. Le lendemain, cultivez les bactéries dans un bouillon d’infusion cerveau-cœur. Ensuite, ajoutez 1 ml de bouillon dans un tube stérile de 1,5 ml.
2. Centrifuger à 4 000 x g pendant 5 min à température ambiante. Ensuite, jetez le surnageant et remettez la pastille en suspension dans 1 ml de solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS). Répétez cette étape une fois.
3. Transférez 100 μl de la solution remise en suspension dans 900 μl de 1x PBS et mesurez l’absorbance de la culture diluée à une longueur d’onde de 600 nm dans un spectrophotomètre.
4. Déterminer la viabilité et les unités formant colonies (UFC) de l’inoculum en cultivant des dilutions en série de 1:10 sur des plaques de gélose au chocolat et en l’incubant pendant une nuit à 37 °C et 5 % de CO₂.
5. En fonction de la viabilité et des UFC déterminées à l’étape précédente, ajuster l’inoculum à une concentration finale de 20 x 10⁶ UFC/ml.

Matériaux