Prélèvement de liquide de lavage broncho-alvéolaire sur un modèle de souris infecté par Haemophilus influenzae non typable

Résumé

Source : Venuprasad, K., et al. Administration intra-trachéale d’Haemophilus influenzae dans des modèles murins pour étudier l’inflammation des voies respiratoires. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo montre la collecte et le traitement d’un liquide de lavage broncho-alvéolaire d’une souris euthanasiée infectée par Haemophilus influenzae non typable pour une analyse en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Collection de liquide de lavage broncho-alvéolaire (BALF)
   1. Sacrifiez la souris par luxation cervicale 24 heures après l’infection.
   2. Ouvrez la cavité abdominale de la souris avec des ciseaux anatomiques, coupez l’aorte ventrale pour la faire saigner et exposez la partie ventrale du poumon.
   3. Exposez la trachée et intubez-la à l’aide d’un cathéter de calibre 20. Instillez 0,8 ml de tampon BALF (1x PBS (solution saline tamponnée au phosphate), 0,1 % de dextrose, 10 U/ml d’héparine) et collectez le lavage par aspiration douce. Répétez cette procédure trois fois.
   4. Comptez le nombre total de cellules dans 100 μl de suspension BALF à l’aide d’un hémocytomètre sous un grossissement de 10X avec coloration au bleu de trypan.
   5. Préparez les lames pour la coloration modifiée de Giemsa. Aliquote 100 μl de BALF dans les puits appropriés du cytospin et de la centrifugeuse à 500 x g pendant 5 min. Séchez les lames pendant 10 minutes et colorez les cellules à l’aide d’un colorant Giemsa modifié selon les protocoles du fabricant.
   6. Les cellules restantes peuvent être utilisées pour des analyses ultérieures, telles que le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS), la microscopie confocale, l’expression génique et le western blot.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Dextrose anhydre	Themo Scientific	Réf. R01300
Héparine	Hospira,Inc	RL-3010
Aiguille de seringue 20/26G	BD	(REF305115/175)
Seringue de 1 ml	BD	RÉF 309602
Cathéter 20GA	BD	RÉF 381433
Pince à épiler #5 Acier inoxydable, 11cm de long	Kentscientifique	INS600095
5ml Tubes en polystyrène à fond rond	BD	RÉF 352058
Tubes de microcentrifugation de 1,5 ml	Laboratoires de lumière	A-7001-R
1X PBS (solution saline tamponnée au phosphate)	Gibco	10010-023
Coussin de lyse RBC (10X)	Biolégende	420301