Évaluation de la fréquence des mutations chez les bactéries à l’aide du dosage de la bêta-glucosidase

Abstract

Source : Stefan, A., et al. Les avantages à multiples facettes de la co-expression des protéines chez Escherichia coli. J. Vis. Exp. (96), (2015).

Cette vidéo démontre l’évaluation de la fréquence des mutations chez les bactéries à l’aide d’un test de bêta-glucosidase. Des cultures bactériennes exprimant une ADN polymérase déficiente en relecture sont collectées sur des générations successives. Les erreurs de réplication causées par une relecture réduite peuvent activer un gène de la bêta-glucosidase supprimé. Après centrifugation et perméabilisation, un substrat est ajouté et l’activité enzymatique est mesurée pour quantifier la fréquence des mutations dans les échantillons.

Protocol

1. Isolement des cotransformants d’Escherichia coli ou d’E. coli

1. Préparez des cellules électrocompétentes de la souche appropriée d’E. coli à transformer. Transvaser dans 1 ml de milieu Luria-Bertani (LB) (tryptone, extrait de levure, chlorure de sodium ou NaCl à 10, 5 et 10 g/L, respectivement) une seule colonie de la souche de votre choix, et incuber à 37 °C dans des conditions d’agitation de 180 tr/min. Diluer la pré-culture 1:500 dans 25 ml de milieu LB frais et incuber la culture à 37 °C.
2. En phase logarithmique (0,6 OD), centrifuger la suspension cellulaire à ....

Materials