Extraction et purification de plastoglobules à partir de bactéries photosynthétiques

Dans cet article

Résumé

Source : Shivaiah, K., et al. Isolement de gouttelettes lipidiques de plastoglobules à partir de tissus foliaires de plantes et de cyanobactéries. J. Vis. Exp. (2022)

La vidéo montre l’isolement des plastoglobules des cyanobactéries. Elle commence par une culture de cyanobactéries et se poursuit par la rupture cellulaire à l’aide de la force mécanique. La libération de pigments photosynthétiques indique une lyse réussie. Un gradient de pas de saccharose est ensuite utilisé pour séparer les composants cellulaires par densité, permettant aux plastoglobules de faible densité de former une bande distincte au sommet. Cette fraction est recueillie et conservée pour une analyse plus approfondie.

Protocole

1. Isolement grossier des plastoglobules

Extraction brute de plastoglobules à partir de cyanobactéries
1. Cultivez une culture de 50 mL de Synechocystis sp. PCC 6803 jusqu’à la phase stationnaire (environ 7 à 10 jours) et ajustez la densité cellulaire à une densité optique à 750 nm (OD₇₅₀) de 2,0 à l’aide d’un spectrophotomètre. Pour les conditions de culture, utilisez un milieu BG-11 et cultivez dans un incubateur à une intensité lumineuse de 150 μmol de photons/m²/s, 2 % de CO₂, 32 °C, et avec une agitation continue à 150 tours par minute (tr/min).
2. Pour éliminer les polysacch....

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Résultats

Figure 1 : Isolement et immunoblotting de plastoglobules et de thylakoïdes. (A) Un échantillon représentatif de plastoglobule purifié de Z. mays avant l’extraction du gradient de saccharose. (B) Un éc.......