Préparation de l’extrait de cellule brute de Vibrio natriegens

Résumé

Source : Wiegand, D. J., et al. Expression de protéines acellulaires à l’aide de la bactérie à croissance rapide Vibrio natriegens. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo montre la préparation d’un extrait cellulaire de Vibrio natriegens, une bactérie à croissance rapide connue pour son taux élevé de synthèse des protéines. La pastille bactérienne est lavée et remise en suspension dans un tampon de lyse avant d’être sonicationnée sur de la glace pour éviter la dégradation cellulaire. Le lysat est centrifugé pour séparer les débris cellulaires insolubles, et l’extrait cellulaire est recueilli, congelé et stocké pour une utilisation future.

Protocole

1. Préparation des extraits de cellules brutes de V. natriegens – Culture bactérienne

1. Préparer le milieu de croissance bactérienne de V. natriegens , bouillon de lysogénie version 2 (LB-V2) conformément au tableau 1. Stérilisez le milieu de culture par autoclavage. Laissez le support atteindre la température ambiante (RT). Stockez le support excédentaire sur RT.
   PRUDENCE: Portez un équipement de protection individuelle (EPI) approprié et consultez les instructions spécifiques au laboratoire lorsque vous utilisez un autoclave.
2. Utilisez un stock de glycérol de V . n....

Résultats

Figure 1 : Vue rapprochée du bécher et du support de tube sur la plate-forme de sonication.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tubes de 15 mL	Corning	352196
Tubes de 2 mL	Eppendorf	22363352
Tubes de 50 mL	Corning	352070
Fiole de Dewar - 4L	ThermoScientific	10-194-100C
Acide L-glutamique sel hémimagnésien tétrahydraté	Sigma	49605
Sel de potassium de l’acide L-glutamique monohydraté	Sigma	G1149
Bouillon LB (Miller)	Sigma	N° L3522
Chlorure de magnésium (MgCl₂)	Sigma	Référence M8266
Chlorure de potassium (KCl)	Sigma	P9333
Granulés d’hydroxyde de potassium	Sigma/Roche	1050121000
Sonicateur Q125 et sonde CL-18	Qsonica	4422
Chlorure de sodium (NaCl)	Sigma	Réf. S7653
Vibrio natriegens (type sauvage) Stock lyophilisé	ATCC	14048