Transformation naturelle et expression de la GFP chez la cyanobactérie filamenteuse Phormidium lacuna

Résumé

Source : Weber, N., et al., Transformation naturelle, expression protéique et cryoconservation de la cyanobactérie filamenteuse Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo décrit une procédure de transformation naturelle dans les cyanobactéries filamenteuses à l’aide de l’ADN plasmidique pour obtenir une expression stable de la GFP et une résistance aux antibiotiques par recombinaison homologue.

Protocole

1. Transformation naturelle et expression de la GFP

NOTE: La transformation est basée sur un vecteur plasmidique propagé chez Escherichia coli (E. coli) ; pGEM-T ou pUC19 peuvent être utilisés comme vecteurs de squelette. Des exemples de vecteurs pour l’expression de la protéine fluorescente verte superfolder (sfGFP) sont décrits dans la section des résultats représentatifs.

1. Effectuer toutes les étapes à l’aide de matériel stérile dans des conditions de laboratoire stériles (paillasse propre, verrerie stérile).
2. Inocuculer 2 x 50 mL de milieu liquide f/2 dans deux flacons de 250 mL avec 2 x 1....

Résultats

Graphique 1. Filaments de Phormidium lacuna 5 semaines après la transformation. Le vecteur d’expression sfGFP pMH1 a été utilisé ; la sélection a eu lieu sur un milieu f/2 avec 120 μg/m.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bacto Agar	OttoNorwald	214010
Fluorescence microscope ApoTome	Zeiss
Microscope à fluorescence Axio Imager 2	Zeiss
Kanamycine	Sigma-Aldrich	25389-94-0
Microscope DM750	Zeiss
Kit d’extraction de plasmides de préparation Midi NucleoBond Xtra Kit Midi	Macherey-NAGEL GmbH & Co. KG	REF740410,50
Source lumineuse, tube fluorescent L18W/954 lumière du jour	OSRAM		Culture de cyanobactéries
Source lumineuse, panneau LED XL 6500K 140 W	Étoile de floraison	N/A	Culture de cyanobactéries
Boîtes de Pétri polystyrène, 100 mm x 20 mm	Merck	Réf. P5606-400EA
Boîtes de Pétri polystyrole, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Pipetman 100-1 000 μL	Gilson	Réf. : FA10006M
Pipetman 10-100 μL	Gilson	Réf. : FA10004M
Pipettes en plastique 10 mL, stériles	Greiner	607107
Agitateur Unimax 2010	Heidolph Instruments		Pour la culture
Tube en plastique, stérile, 50 mL	Greiner	227261
Ultraturrax Silent Crusher M	Heidolph Instruments		Homogénéisateur
F/2+ fluide	f/2-moyen, avec une augmentation de 10 fois plus de NaNO₃ et de NaH₂PO₄ (0,88 mM NaNO₃, 36 μM NaH₂PO₄
Gélose F/2+	3 % (p/v) de gélose bacto, eau de mer artificielle, solution d’oligo-éléments à 0,1 % (v/v), solution vitaminique à 0,05 % (v/v), 8,8 mM de NaNO₃, 0,36 mM de NaH₂PO₄