Motilité de glissement chez les filaments de Phormidium lacuna

Résumé

Source : Weber, N., et al., Transformation naturelle, expression protéique et cryoconservation de la cyanobactérie filamenteuse Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo montre la procédure d’évaluation de la motilité du glissement chez Phormidium lacuna en homogénéisant les cultures de filaments pour créer une suspension uniforme, en préparant une configuration de test de plaque de Petri sur une lame de microscope et en visualisant le mouvement du filament.

Protocole

1. Dosage du mouvement en milieu liquide
   1. Pour l’observation directe de la motilité, transvaser 8 mL de milieu contenant P. lacuna dans une boîte de Pétri de 6 cm. Attendez quelques minutes jusqu’à ce que l’échantillon atteigne la température ambiante, puis recouvrez la boîte de Pétri d’une feuille de cellophane.
   2. Placez une lame de microscope sur la table x-y d’un microscope standard avec une caméra. Allumez la lumière du microscope. Idéalement, utilisez toujours les mêmes paramètres électriques et optiques pour l’éclairage. Déplacez un objectif 4x ou 10x sur la trajectoire de la lumière.
   3. Placez la boîte de Pétri sur le dessus de la lame. Ajustez les filaments simples ou les faisceaux de filaments par les mouvements x, y et z de la table.
      NOTE: En raison de la disposition tridimensionnelle, seule une partie de la section concernée peut être mise au point. La feuille de cellophane permet de régler la mise au point sans restriction.
   4. Observez les mouvements des filaments simples ou des faisceaux. Assurez-vous que la lentille de l’objectif ne touche pas le liquide. Enregistrez les mouvements des filaments avec une caméra de microscope standard.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Verrerie, différente
Microscope DM750	Zeiss
Caméra oculaire MikrOkular Full HD	Bresser		pour les enregistrements en time-lapse, couplé à un mini-ordinateur Raspberry Pi
Boîtes de Pétri polystyrole, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Logiciel, URL
ImageJ		Logiciel pour le traitement de l’image (intensités de pixels, diamètre du cercle)
Milieux de culture
Eau de mer artificielle	0,41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl, 2,4 mM NaHCO₃ ,0,84 mM KBr, 0,49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 -Fluide liquide	eau de mer artificielle, solution d’oligo-éléments à 0,1 % (v/v), solution vitaminique à 0,05 % (v/v), 0,88 mM de NaNO₃, 36 μM de NaH₂PO₄
Solution d’oligo-éléments	0,36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄ , 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0,91 μM MnCl₂
Solution vitaminée	0,3 μM de thiamine-HCl, 2,1 nM de biotine, 0,37 nM de cyanocobalamine