Préparation d’une culture de boues anaérobies dans des conditions sans oxygène

Résumé

Source : Wagner, A. O., et al., Préparation de milieu pour la culture de micro-organismes dans des conditions strictement anaérobies/anoxiques. J . Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre la préparation et l’inoculation de cultures anaérobies à l’aide de boues sans oxygène dans des conditions strictement contrôlées et désoxygénées.

Protocole

Inoculation du milieu

1. Préparez l’inoculum à partir du digesteur anaérobie.
   1. Ajouter 400 ml d’eau distillée dans une fiole et porter à ébullition.
   2. Refroidissez-le (< 30 °C) tout en rinçant durablement l’espace libre avec N₂.
   3. Ajouter environ 100 g de boues dérivées d’un digesteur anaérobie.
      NOTE: Eviter le contact excessif des boues avec l’oxygène.
   4. Enregistrer la masse exacte des boues ajoutées pour la détermination exacte de la dilution.
   5. Remplacez l’espace libre de la fiole par N₂ et fermez-la à l’aide d’un septum en caoutchouc butyle.
   6. Agiter le ballon pendant 30 min à 120 tr/min.
2. Prélever 5 mL d’inoculum à l’aide d’une seringue + d’une canule et l’injecter dans les flacons de sérum préparés.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fioles de culture (120 mL, N20)	Ochs, Allemagne	102046
Septa en caoutchouc butyle (N20)	Ochs, Allemagne	102049
Capuchons en aluminium (N20)	Ochs, Allemagne	102050
Gaz N₂	Messer, Autriche		Pureté 5.0
Seringues + canules	divers
Gaufreur	Ochs, Allemagne	102051
Décrimineur	Ochs, Allemagne	102052
CG2010	Shimadzu