Analyses histologiques et hématologiques pour évaluer les effets de Bacillus subtilis chez les rats soumis à stress thermique

Résumé

Source : Sorokulova, I., et al. Prévention des effets indésirables liés au stress thermique chez les rats par la souche Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo présente des analyses histologiques et de microscopie sanguine utilisées pour évaluer les effets protecteurs de Bacillus subtilis chez les rats exposés au stress thermique.

Protocole

1. Analyse histologique

1. Prélever des échantillons d’intestin grêle sur chaque rat expérimental par une intervention chirurgicale. Fixez les échantillons dans le fixateur de Bouin, intégrez dans la paraffine, préparez des sections de 6 μm et colorez les sections avec de l’hématoxyline et de l’éosine selon les procédures standard.
2. Utilisez un système de microscope haute résolution pour mesurer la hauteur des villosités intestinales et l’épaisseur totale de la muqueuse dans chaque échantillon (grossissement 100X). Analysez 4 échantillons de chaque rat et effectuez au moins vingt mesures dans chaque échantillon. Express donne des résultats en micromètres.

2. Microscopie optique à haute résolution du sang

1. Utilisez une plateforme d’isolation des vibrations comme base pour le système de microscope ainsi que pour la caméra vidéo et l’ordinateur pour enregistrer les images en direct. Calibrez les images de test à l’aide d’une lame Richardson.
2. Placez 7 μl de sang fraîchement prélevé de chaque rat sur une lame en verre, une toile de revêtement, photographiez et enregistrez dix images de 72 × 53,3^{μm 2} dans chaque échantillon (grossissement 1 700X).
3. Mesurez la concentration des vésicules à l’aide d’un logiciel fournissant en temps réel des images optiques à vue directe haute résolution. Examinez au moins 20 images pour chaque condition expérimentale.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Solution physiologique tamponnée au phosphate (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Le fixateur de Bouin	Sciences de la microscopie électronique, Hatfield, PA, États-Unis	15990
Diapositive d’essai de Richardson	Science de la microscopie électronique, Hatfield, PA, États-Unis	80303
Appareil photo Sony DXC-33	Sony
Système optique de microscope optique	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Logiciel Image-Pro Plus	Media Cybernetics, MD, USA