Test de motilité pour comparer les souches de Vibrio cholerae utilisant le chlorure de triphényltétrazolium

Résumé

Source : Brumfield, K. D., et al. Techniques de laboratoire utilisées pour maintenir et différencier les biotypes d’isolats cliniques et environnementaux de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo montre un test d’agar souple utilisant du chlorure de triphényltétrazolium pour évaluer et comparer la motilité des souches de Vibrio cholerae en visualisant l’activité métabolique via la formation de zones rouges autour des cellules migratrices actives.

Protocole

1. Essai de motilité
   1. Préparez une ou plusieurs cultures nocturnes de souches de Vibrio cholerae dans un bouillon liquide LB (Luria-Bertani).
   2. Comprimez 1,8 mL de culture nocturne pendant 2 minutes par centrifugation (≥8 600 x g) dans un tube stérile de microcentrifugation de 2 mL et retirez le surnageant à l’aide d’une pipette. Resuspendez la pellete cellulaire dans 1,8 mL 1x PBS (sérum tampon phosphaté) par pipetage.
   3. Répétez la procédure de lavage trois fois, suivie d’une resuspension finale en 1,8 mL 1x PBS.
   4. Inoculez les plaques d’agar de motilité en insérant une piqûre inoculante dans la culture liquide lavée et en piquant verticalement dans le milieu. Entre chaque inoculation, stériliser la pointe en fil de fer à l’aide d’un bec Bunsen, et lors de la piqûre d’agar, assurez-vous que la poignardée d’inoculation ne se plie pas, car cela peut modifier les résultats.
   5. Incubez les plaques côté couvercle vers le haut pendant 14 à 24 heures à 37 °C. Après 14 heures, surveillez attentivement les plaques de motilité pour éviter une prolifération excessive des cultures.

Matériaux