Essai Voges-Proskauer pour différencier les biotypes de Vibrio cholerae

Résumé

Source : Brumfield, K. D., et al., Techniques de laboratoire utilisées pour maintenir et différencier les biotypes des isolats cliniques et environnementaux de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo montre le test Voges-Proskauer (VP) pour différencier trois biotypes de Vibrio cholerae : classique, type sauvage d’El Tor et variante d’El Tor. Chaque culture est inoculée dans un milieu contenant du glucose, incubée, puis traitée avec du α-naphthol et de l’hydroxyde de potassium pour détecter la présence d’acétoïne. Une couleur rosé-rougeâtre, indiquant une réaction VP positive, n’est observée que dans le biotype sauvage d’El Tor, le distinguant des types classique et variant.

Protocole

Essai Voges-Proskauer (VP)

1. Préparez une ou plusieurs cultures toute la nuit dans un bouillon liquide LB.
2. Inoculez 4 mL de bouillon Voges-Proskauer rouge de méthyle, ou MR-VP, en pipettant 10 μL de culture préparée au lendemain dans un bouillon MR-VP de 4 mL dans un tube de culture stérile, puis incubez par aération dans un incubateur shaker à 225 tr/min pendant 12 à 16 heures à 37 °C.
3. Ajoutez 150 μL de 5 % (p/v) de α-naphthol et 50 μL de 40 % (p/v) KOH à 1 mL d’aliquotes de culture nocturne MR-VP dans des tubes de culture stériles, respectivement.
4. Formez brièvement un vortex et laissez reposer à température ambiante jusqu’à 4 heures jusqu’à ce que le changement de couleur se développe.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomédicals	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189