Essai de superposition d’agar mou pour détecter la mort médiée par bactériocine chez Pseudomonas syringae

Résumé

Source : Hockett, K. L., et Baltrus, D. A. Utilisation de la technique de superposition à l’agar mou pour dépister les composés inhibiteurs produits par des bactéries. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo illustre la procédure pour détecter la mort médiée par la bactériocine en repérant le surnageant d’une souche donneuse induite par antibiotique sur une superposition d’agar mou contenant une souche test. Les zones claires formées après l’incubation indiquent une inhibition bactérienne.

Protocole

1. Préparation des superpositions et tests des surnatants pour l’activité

1. Inoculez une seule colonie d’une souche de P. syringae à tester pour la sensibilité dans 3 ml de KB (King’s medium B), incubez toute la nuit avec secouement à température ambiante.
2. Le lendemain matin, diluez la culture à 1/100 pour en obtenir un peu de ko. Incubez 3-4 heures en secouant à température ambiante.
3. Préparez de l’agar à l’eau stérilisée en autoclavant une suspension de 0,35-0,7 % (p/v) d’agar dans de l’eau ultrapure.
   NOTE: Un stock d’agar d’eau douce peut être fondu au micro-ondes et réutilisé à plusieurs reprises ; Une nouvelle supe....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Mitomycine C	Santa Cruz Biotechnologie	SC-3514	Cancérigène. Utilisez des équipements de protection adaptés (c’est-à-dire des gants, une protection oculaire et un masque facial), en particulier lors de la préparation de la solution d’origine.
Agar de qualité bactériologique	Genesee Scientific	20-274