Surveillance continue du bruit biologique chez les bactéries à l’aide de la microscopie en accéléré

Résumé

Source : Chaimovitz, E. A., et al. Mesure continue du bruit biologique dans Escherichia coli à l’aide de la microscopie en accéléré. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo démontre la visualisation en temps réel du bruit biologique chez E. coli en suivant les fluctuations de la fluorescence de la GFP lors de la croissance et de la division bactérienne à l’aide de la microscopie en accéléré.

Protocole

1. Préparation de l’échantillon pour l’imagerie microscopique
   1. Retirez la fiole du bain-marie. Essuyez l’extérieur de la fiole et laissez-la refroidir à température ambiante (25 °C).
      NOTE: Retirez la fiole environ 3 minutes avant la fin du minuteur.
   2. Verser 3 mL de gel en continu sur le périmètre de la plaque en mouvement circulaire. Laissez solidifier quelques minutes.
   3. Scellez les plaques avec du ruban adhésif et percez plusieurs trous avec une aiguille de 25 G. Retournez toutes les assiettes pour éviter que la condensation d’eau ne s’infiltre sur le gel.
   4. Incubez toutes les gamelles à 4 °C pendant 30 minutes pour permettre une solidification complète tout en évitant la mitose cellulaire.
      NOTE: Laissez les échantillons à 4 °C pour les mesures successives, pas plus d’un jour.
   5. Démarrez le microscope selon les instructions du fabricant.
   6. Trouvez la mise au point initiale avec l’objectif à amplification la plus faible et activez le système de mise au point automatique (AFS).
   7. Utilisez de l’huile si besoin, noyez l’objectif d’huile et étalez-le soigneusement en déplaçant la plaque avec un contrôleur de plateforme (pas manuellement), et l’AFS peut être réactivé.
   8. Utilisez la section relative dans la direction Z, en suivant la suggestion par défaut pour les sections transversales en pas Z.
      NOTE: Prenez des images en champ lumineux toutes les 5 minutes et des images fluorescentes toutes les 20 minutes. Parfois, il faut ajuster la mise au point pendant les 30 premières minutes. Préchauffer la boîte de l’incubateur et l’huile du microscope, tout en réfrigéré l’échantillon, tend à réduire la perte initiale de mise au point.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Antenne en verre 35 mm	Mattek	P35G-0.170-14-C	Épaisseur correspondant à la lentille du microscope.
Agarose	Lonza	5004	Préparation LB
Eclipse Ti	Nikon		Microscope inversé
Immersol 518F	Zeiss	4449600000000	Huile d’immersion
Bande parafilm	Bemis	PM-996	Appelée bande dans le texte