In vitro Modèle de culture par lots pour imiter la fermentation du côlon par le microbiote intestinal humain

Résumé

Source : Ahmadi, S., et al. Un modèle de culture batch-in vitro visant à estimer les effets des régimes interventionnels sur le microbiote fécal humain. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo démontre une méthode pour modéliser la fermentation microbienne intestinale en incubant des échantillons fécales avec des fibres fermentescibles alimentaires dans des conditions anaérobies afin d’étudier la production de métabolites par le microbiote intestin.

Protocole

Toutes les procédures concernant la collecte d’échantillons ont été réalisées conformément aux directives IRB de l’institut.

PRUDENCE: Consultez les fiches de données de sécurité des matériaux appropriées et suivez les instructions et directives pour une formation appropriée au niveau de biosécurité 2 (BSL-2). Suivez toutes les étapes de culture conformément aux règles standard de biosécurité et utilisez un cabinet BSL-2 en conditions aseptiques. De plus, les échantillons fécaux provenant de différents modèles et sujets humains peuvent présenter un risque potentiel de propagation de maladies à transmission microbienne. Consultez immédiatement un médecin en cas de bl....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bicarbonate d’ammonium	Sigma-Aldrich	217255
Sulfate d’ammonium	TGI	C2388	Toxique
Chlorure de calcium dihydré	Sigma-Aldrich	C3306	Irritant
Chlorure cobalteux hexahydré	Sigma-Aldrich	255599
Chlorure cuprique dihydraté	Acros organiques	2063450000	Toxique, irritant
Cystéine-HCl	Sigma-Aldrich	C121800
D-biotine	Sigma-Aldrich	B4501
Acide D-pantothénique	Alfa Aesar	A16609
Dihydrat disodium d’éthylénédiaminetétraacétate	Biorad	1610729
DL-α-méthylbutyrate	Sigma-Aldrich	W271918
Sulfate ferreux heptahydré	Sigma-Aldrich	F8263	Toxique
Acide folique	Alfa Aesar	J62937
Glucose	Sigma-Aldrich	G8270
Hemin	Sigma-Aldrich	H9039
Hepes	Alfa Aesar	A14777
Isobutyrate	Alfa Aesar	L04038
Isovalérat	Alfa Aesar	A18642
Chlorure de magnésium hexahydraté	Sigma-Aldrich	M8266
Tétrahydrate de chlorure de manganèse	Sigma-Aldrich	221279
Niacin (acide nicotinique)	Sigma-Aldrich	N4126
Chlorure de nickel(II) hexahydrate	Alfa Aesar	A14366	Toxique
N-valérat	Sigma-Aldrich	240370
Acide P-aminobenzoïque	MP Chine	102569	Toxique, irritant
Acide phosphorique	Sigma-Aldrich	P5811
Phosphate de dihydrogène de potassium	Sigma-Aldrich	P5504
Phosphate d’hydrogène potassique	Sigma-Aldrich	1551128
Pyridoxine	Alfa Aesar	A12041
Resazurin	Sigma-Aldrich	R7017
Riboflavine	Alfa Aesar	A11764
Carbonate de soude	Sigma-Aldrich	1613757
Chlorure de sodium	Fisher BioReagents	7647-14-5
Hydroxyde de sodium	Fisher Chemicals	S320
Molybdate de sodium dihydraté	Acros organiques	206375000
Chlorhydrate de thiamine	Acros organiques	148991000
Trypticase	BD Biosciences	211921
Vitamine B12	Sigma-Aldrich	V2876
Extrait de levure	Sigma-Aldrich	70161
Sulfate de zinc heptahydrate	Sigma-Aldrich	Z0251
Filtre à membrane de 0,22 μm
Billes magnétiques de purification AMPure	Agencourt
Chambre anaérobie avec incubateur	Système anaérobie forme, Thermo Scientific, États-Unis
Filtre à bouteille	Corning
Étamine
Ph-mètre
Tourbillon	Thermoscience