Surveillance de la croissance bactérienne dans des formulations de milieux distincts à l’aide d’un microbioréacteur automatisé

Résumé

Source : Hemmerich, J., et al. Protocole pour l’optimisation de la production de protéines hétérologues utilisant la technologie automatisée des microbioréacteurs. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo démontre l’utilisation d’un micro-opérateur automatisé pour surveiller la croissance bactérienne et la sécrétion de protéines fluorescentes en réponse à différentes formulations de milieux. Une bactérie génétiquement modifiée exprimant une protéine fluorescente sécrétoire est cultivée sous sélection antibiotique et inoculée dans des puits à variation nutritive. Les mesures optiques en temps réel de la densité cellulaire et de la fluorescence permettent une analyse comparative de la production de protéines à travers différentes conditions de croissance.

Protocole

1. Préparation des matériaux et procédures de définition
NOTE: Il est conseillé de définir et de fixer les méthodes expérimentales à un niveau détaillé. Cette standardisation garantit que différents résultats peuvent être attribués à une variabilité biologique intrinsèque ou à différentes compositions de milieux. ​
NOTE: Solutions de stock média : Préparez des solutions individuelles pour tous les composants médias étudiés. Préparez des stocks hautement concentrés pour permettre la dilution de différents volumes pour tous les composants. Cela signifie qu’après avoir combiné toutes les solutions de stock à leur v....

Résultats

Figure 1 : Capture d’écran de la liste de pipetage volumineux pour l’analyse de sensibilité. Les entrées de la première colonne attribuent un identifiant unique à tous les volumes d’une ligne ; cet identifiant est le numéro de puits MTP du .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
BioLector	M2P-Labs	G-BL-100
Assiette fleurie	M2P-Labs	MTP-48-BOH	Pour la culture dans l’appareil BioLector
Feuille d’étanchéité	M2P-Labs	F-GP-10	Scellement stérile pour la Floriste
MATLAB	Mathworks	2016b
KriKit	Forschungszentrum Jülich	n/a	Disponible gratuitement, installation MATLAB requise
Robot pipetage Janus	Perkin Elmer	n/a	Inclut l’installation du logiciel « WinPrep »
Microplaque de puits profond à 12 colonnes	E&K Scientific	EK-2034	Conteneur pour solutions de stock moyen
C. glutamicum pCGPhoDBs-GFP	n/a	n/a	Porte le plasmide pEKEx2 avec fusion du gène GFP et du peptide signal PhoD de B.subtilis comme insert d’expression. Le plasmide offre une résistance à la kanamycine. Décrit et publié par Meissner et al. Appl Microbiol Biotechnol 76 (3), 633–42 (2007)