Article de méthode

Hyperinsulinémique euglycémique-Clamp chez le rat conscient

DOI :

10.3791/2432

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7 février 2011

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1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine, University of Calgary, 2Faculty of Kinesiology, University of Calgary

Dans cet article

Résumé

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La pince hyperinsulinémique-euglycémique est le «gold standard» pour l'évaluation de l'action d'insuline. L'insuline est perfusée à un taux constant stimulant l'absorption du glucose. La quantité de glucose exogène infusé pour contrer cette baisse est révélatrice de sensibilité à l'insuline. Voici la procédure est effectuée sur une conscience, rat effrénée.

Résumé

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Diabète de type 2 (DT2) est l'augmentation rapide de la prévalence. Caractérisés par une production d'insuline insuffisante ou l'impossibilité d'utiliser l'insuline produite, les résultats DT2 chez des niveaux élevés de glucose dans le sang. Le «étalon-or» dans l'évaluation de sensibilité à l'insuline est une pince hyperinsulinémique euglycémique ou pince-insuline. Dans cette procédure, l'insuline est perfusée à un taux constant résultant en une baisse de la glycémie. Afin de maintenir la glycémie à un niveau constant, le glucose exogène (D50) est injecté dans la circulation veineuse. La quantité de glucose perfusée pour maintenir une homéostasie est révélateur de sensibilité à l'insuline. Ici, nous montrons la procédure de serrage de base dans la chronique cathétérisés, débridée, le rat conscient. Ce modèle permet au sang d'être recueillies avec un minimum de stress pour l'animal. Après l'induction de l'anesthésie, une incision médiane est faite et les artère carotide commune gauche et droite veine jugulaire sont cathétérisés. Cathéters insérés sont rincés avec du sérum physiologique hépariné, puis extériorisé et sécurisé. Les animaux sont autorisés à récupérer pendant 4-5 jours avant les expériences, avec un gain de poids contrôlée quotidiennement. Seuls les animaux qui regagner du poids à la pré-chirurgie niveaux sont utilisés pour des expériences. Le jour de l'expérience, les rats sont mis à jeun et connectés à des pompes contenant de l'insuline et D50. Glycémie de base est évaluée à partir de la ligne artérielle et a utilisé un indice de référence tout au long de l'expérience (euglycémie). Suite à cela, l'insuline est perfusée à un taux constant dans la circulation veineuse. Pour correspondre à la baisse de la glycémie, D50 est perfusé. Si le taux de perfusion D50 est supérieur au taux d'absorption, une augmentation de la glycémie va se produire. De même, si le taux est insuffisant pour correspondre à l'ensemble du corps l'absorption du glucose, une baisse se produira. Titrage de glucose se poursuit jusqu'au lectures de glucose stables sont atteints. Les niveaux de glucose et des taux de perfusion de glucose au cours de cette période de stabilité sont enregistrés et signalés. Les résultats fournissent un indice de sensibilité d'insuline du corps tout entier. La technique peut être affiné pour répondre aux exigences spécifiques d'expérimentation. Il est en outre renforcée par l'utilisation de traceurs radioactifs qui peuvent déterminer stimulée par l'insuline des tissus spécifiques captation du glucose ainsi que l'ensemble du glucose du corps.

Protocole

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A: cathétérisme chirurgicale de circulation artérielle et veineuse

Partie 1: Préparation du cathéter artériel et veineux

  1. Coupez 15 cm de PE-50 (diamètre intérieur de 0,58 mm (0,023 ") x diamètre extérieur de 0,965 mm (0,038"). Coupez une section de tube en silastic 1mm (0,76 mm (0,030 ") de diamètre interne x 1.65mm (0,065 ") de diamètre extérieur) pour l'utiliser comme retenue de billes. Les billes de retenue empêche le rat de se retirer le cathéter une fois qu'il est en place.
  2. Insérez le bout des micro-pinces à disséquer dans la lumière de la bille de retenue et de douceur tenir le bout de la pince à part pour ....

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Discussion

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Initialement développé pour enquêter sur sensibilité à l'insuline chez l'homme, la procédure de fixation a été adapté à d'autres espèces, y compris des rats de laboratoire et les souris. Étude des modèles animaux d'insulino-résistance fournit une aide significative dans la compréhension de la physiopathologie de la sensibilité à l'insuline et des pathologies associées ainsi que l'identification des interventions thérapeutiques qui ont une valeur clinique 1,2. Plusieurs méthodes pour év.......

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Déclarations de divulgation

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Des procédures ont été approuvées par l'Université de Calgary et de protection des animaux Utiliser Comité et respecter par l'Association canadienne pour les directives de science de laboratoire pour l'expérimentation animale. Les auteurs n'ont aucun conflit d'intérêts ou les divulgations.

Remerciements

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Cette étude a été financée par les Instituts canadiens de recherche en santé et Génome Canada.JS détient bourses d'aide salariale de la recherche médicale de l'Alberta Heritage Foundationfor, Fondation des maladies du cœur du Canadaand l'Association canadienne du diabète. Un merci spécial à M. David Wasserman et Bracy Bingle pour enseigner cette procédure pour le laboratoire Shearer.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Nom du réactif Société Numéro de catalogue Commentaires (optionnel)
Tuyaux en polyéthylène Intramedic (PE-50) Fisher Scientific 14 à 170-12B Diamètre intérieur de 0,58 mm (0,023 ") x diamètre extérieur de 0,965 mm (0,038")
Dow Corning Silastic tube de laboratoire Fisher Scientific 11 à 189-15C Diamètre intérieur de 0,76 mm (0,030 ") de diamètre x 1.65mm extérieur de (0,065")
Tygon S-50-HL tubes médicaux Harvard Apparatus PY2 72-1251 Diamètre intérieur de 3,2 mm (0,125 ") de diamètre x 4,7 mm d'Outer (0,1875")
Loctite Super Glue Grand & Toy 32237 Gel de contrôle
Stérile lame chirurgicale VWR BD371610
Courbé Micro pince à disséquer George Tiemann & Co. 160-20 x 2
Droit Micro pince à disséquer George Tiemann & Co. 160-15 x 2
Hémostatique courbée George Tiemann & Co. 105-1135 x 2
Hémostatique droite George Tiemann & Co. 105-1130 x 2
Gardes Astuce hémostatique Robbins Instruments, Inc 15.09-2-004
Ciseaux de chirurgie droites George Tiemann & Co. 105-402
VENOJECT multi-échantillon Luer Adapter Terumo Medical Products 810127A Calibre 21, 1 po
Introducteur de cathéter stérile Becton Dickinson 406999
14 aiguille de calibre Blunt Becton Dickinson 511310 Calibre 14, 2 po
Stérile suture chirurgicale Johnson & Johnson Medical Products 1679H Soie, taille 3-0
Non stériles suture chirurgicale Angiotech Pharmaceuticals, Inc SP116 Soie, taille 4-0
Cotons-tiges VWR 10806-005
Tampons de gaze 4ply VWR CA43845-062
Clippers petits animaux sans fil Harvard Apparatus 729063
L'isoflurane Halocarbon Products Corp IPN-45
Anesthésique panier Benson Medical Industries, Inc
L'éthanol à 70% Fisher Scientific HC-1000
Solution antiseptique Betadine Ouest Drug Distribution Centre Ltd 105267
Modèle 11 Plus pompe seringue Harvard Apparatus 702208
Coupleurs tube acier inoxydable Harvard Apparatus 72-4434 Calibre 23, 0,3 po
Tubes en acier inoxydable Bouchons Harvard Apparatus 72-4436 Calibre 23, 0,5 po
Acier inoxydable Aiguilles Blunt Instech Laboratories, Inc LS22 Calibre 22
60 Degré Y Connecteurs Petites pièces STCY-22-05 Calibre 22
CritSpin micro-hématocrite Centrifugeuse Iris Sample Processing CS12
Centrifugeuse Mini Fisher Scientific 05-090-100
Tubes à centrifuger Micro VWR 53550-778
Tubes à centrifuger 50ml polypropylène VWR 89004-364
1ml Seringues en plastique Astuce Slip Becton Dickinson 309602
3ml plastique Seringues Astuce Luerlok Becton Dickinson 309585
Injection anticoagulant de l'héparine Ouest Drug Distribution Centre Ltd 102824 Fabricant: LEO Pharma Inc Conc. 1000 UI
Solution d'EDTA Promega Corp V4231 0,5 M, pH 8,0
Saline Ouest Drug Distribution Centre Ltd ABB7983154 Fabricant: Chlorure de sodium à 0,9% de Hospira
Dextrose à 50% Vétoquinol 8DEX012D
Humulin-R Eli Lilly HI-210 100U/ml
Seringues à insuline 1ml Becton Dickinson 309311
Fisherbrand * Hémato-Seal scellant Fisher Scientific 02-678
Fisherbrand * microhématocrite Tubes capillaires Fisher Scientific 22-362-574
One Touch Ultra bandelettes de test LifeScan, Inc AW 085-314H
One Touch Ultra compteur de la glycémie LifeScan, Inc AW 085-314B
Sodium pentobarbital Ceva Santé Animale 1715 138 Conc. 54.7mg/ml
Red Tape Étiquetage de laboratoire VWR 89097-932
Blue Tape Étiquetage de laboratoire VWR 89097-936
Peser échelle Fisher Scientific 01-913-88
Vortex VWR 58815-234
Minuterie VWR 62344-641

Références

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  1. Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
  2. Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H.

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Mots-clés

Clamp hyperinsulin miquesensibilit l insulinecath t risation de l art re carotidecath t risation de la veine jugulairetaux de perfusion du glucosesolution saline h parinis emod le de rat conscientr cup ration postop ratoireglyc mie basale

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