Quantifier la chasse bactérienne pour évaluer le potentiel de transmission de l’infection chez la drosophile

Résumé

Source : Siva-Jothy, J. A., et al., Infection bactérienne orale et déplongement chez Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo illustre la procédure pour surveiller la déversation bactérienne chez Drosophila en transférant une mouche infectée à travers plusieurs tubes contenant de la nourriture, en récupérant les bactéries éliminées et en quantifiant les colonies viables par dilution et plaque en série.

Protocole

1. Mesurer la déplongation bactérienne
   1. Mesurez la perte de cheveux en même temps que la charge interne.
   2. Après infection, transférez les mouches individuelles dans des tubes microcentrifuge de 1,5 mL contenant ~50 μL de milieu Lewis pendant 24 heures.
   3. Retirez les mouches pour la mesure de la charge interne et lavez les tubes avec 100 μL de 1x PBS (sérum tampon phosphaté) en vortexant fortement pendant 3 secondes.
   4. Mesurez les UFC (unités formant des colonies) dans ce lavage en plaquant sur un agar nutritif LB (Luria-Bertani).
   5. Après infection, transférez les mouches individuelles dans des tubes microcentrifuge de 1,5 mL contenant ~50 μL de milieu Lewis pendant 24 heures.
   6. Transférer les mouches dans de nouveaux tubes microcentrifuges contenant ~50 μL de milieu Lewis pendant 24 heures supplémentaires. Lavez les tubes contaminés avec 100 μL de 1x PBS en faisant un vortex abondant pendant 3 secondes.
   7. Mesurez les UFC dans ce lavage en plaquant sur un agar nutritif LB.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fioles	Sarstedt Ltd.	58.49	Tube à base plate en polystyrène 75 mm x 23,5 mm, 23 ml
Agar	Sigma-Aldrich	A7002	Agar, cendres 2,0-4,5 %
Cassonade	Bidvest	66032	Cassonade douce claire
Maïs	Terre de la colombe		Farine de maïs biologique
Levure de fermipan	Bidvest	96360	Levure sèche et instantanée
Plaques de Petri	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	Boîte de Petri X600 90 x 16,2 mm Triple Évent Stérile
Tube Eppendorf (1,5 ml)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Bouchon poussoir à base conique Micro Sarstedt 1,5 ml neutre standard
Éthanol	VWR International Ltd.	20821.33	ÉTHANOL ABSOLU ANALAR NP ACS/R.PE - Qualité analytique
Bouillon LB, Miller	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Contient 10g de tryptone, 5g d’extrait de levure, 10g de chlorure de sodium par litre
Microplaques à 96 puits	Fournitures de laboratoire scientifique Ltd.	353072	Microplaque de culture cellulaire en polystyrène traitée TC à fond plat bien transparent Falcon 96 avec couvercle stérile
Vortex	Fisherbrand		Mélangeur à vapeur 75W 50-6-Hz 220-240V
Embouts de pipette de 10 μL	Greiner Bio-one Inc	741015	Chargez facilement à la manière gilson. Diplômé, clair, recharge, 960 pièces
Pointes de pipette de 200 μL	Greiner Bio-one Inc	741065	Chargez facilement à la manière gilson. Diplômé, clair, recharge, 960 pièces
Pointes de pipette de 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	741045	Chargez facilement à la manière gilson. Diplômé, clair, recharge, 960 pièces
Pointes de pipette filtrées de 20 μL	Greiner Bio-one Inc	774288	Embout de filtre façon gilson. Transparent, rack bleu, pack simple, sans R/Dnase, 10 racks de 96 pièces
Pointes de pipette filtrées de 200 μL	Greiner Bio-one Inc	739288	Embout de filtre façon gilson. Transparent, rack bleu, pack simple, sans R/Dnase, 10 racks de 96 pièces
Pointes de pipette filtrées de 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	740288	Embout de filtre façon gilson. Transparente, rack bleu, pack simple, sans R/Dnase, 10 racks de 60 pièces