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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Inoculation avec Pseudomonas aeruginosa
- Diluer la culture PAO1 :lux pendant la nuit à OD600 = 0,05 dans 75 mL de milieu de bouillon de lysogenèse (LB) contenant 100 μg/mL de carbénicilline et faire croître la bactérie jusqu’à ce que la culture atteigne une phase exponentielle précoce (OD600≈0,3). Cela devrait prendre environ 2 à 3 heures.
- Diluer PAO1 :lux dans du sérum physiologique tamponné phosphate (PBS) à une concentration de (7,5 ± 2,5) x 102 UFC/mL. Veillez à préparer un excès d’inoculum pour garantir un volume suffisant et permettre le plaquage après l’expérience. Si vous transportez entre les installations, utilisez un double confinement dans une boîte étanche clairement marquée Biohazard.
- Effectuer tous les travaux avec P. aeruginosa et les souris en utilisant un équipement de protection individuelle approuvé dans un cabinet de sécurité biologique (BSC) approuvé par l’ABSL-2. Les équipements réutilisables comme la balance doivent être recouverts d’un film plastique pour éviter toute contamination.
- Anesthésiez la souris avec de l’isoflurane à 3 %. Pèse la souris et note le poids. Injecter la souris par voie sous-cutanée avec du chlorure de sodium stérile préchauffé à 0,9 %, 250 μL sur chaque flanc, pour un total de 500 μL.
- Si le film transparent de la souris s’est détaché pendant la nuit, retirez soigneusement toute croûte et appliquez un nouveau pansement.
- Utilisez une seringue de 500 μL à tuberculine 27 G pour injecter 40 μL de suspension PAO1 :lux à travers le pansement transparent dans chaque plaie. Différentes souris doivent être utilisées pour les contrôles de plaies non inoculées/PBS afin d’éviter la contamination croisée du côté controlatéral.
- Remettez la souris dans sa cage sur un coussin chauffant et surveillez jusqu’à ce qu’elle se réveille. Toutes les souris doivent être logées individuellement dans des cages séparées pour éviter toute contamination croisée.
- Fournissez une pâte de compléments nutritifs riches en calories entre des granulés alimentaires sur le sol de la cage.