Article de méthode

Essai de co-infiltration pour le dépistage des effecteurs pathogènes qui suppriment le silence de l’ARN végétal

30 janvier 2026

Dans cet article

Résumé

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Source : Shi, J., et al. Dépistage et identification des suppresseurs de silencieux d’ARN à partir des effecteurs sécrétés de pathogènes des plantes. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo montre un essai de co-infiltration permettant d’identifier les protéines effectrices pathogènes qui suppriment le silence de l’ARN dans Nicotiana benthamiana 16c. Un reporter fluorescent et un gène effecteur candidat sont délivrés dans les feuilles des plantes via Agrobacterium. Normalement, le silence de l’ARN dégrade les transcrits rapporteurs, réduisant ainsi la fluorescence. Les effecteurs suppresseurs bloquent cette réponse, préservant la fluorescence. Ce test offre une méthode rapide et visuelle pour dépister les effecteurs microbiens qui interfèrent avec la défense de l’hôte.

Protocole

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Co-infiltration Nicotiana benthamiana leaves

  1. Mélangez des volumes égaux d’une culture d’Agrobacterium contenant du 35S-GFP avec une culture d’Agrobacterium contenant le suppresseur du virus mosaïque du concombre 35S (CMV2b), un effecteur putatif ou un vecteur vide (EV).
  2. Infiltrez prudemment et lentement les suspensions mixtes d’agrobactérie sur les côtés abaxiaux des feuilles de N. benthamiana 16c à l’aide d’une seringue sans aiguille de 1 mL.
  3. Retirez la suspension bactérienne restante des feuilles avec des essuie-glaces mous et entourez les bords des plaques infiltrées avec un stylo maker.
  4. Laissez les plantes infiltrées dans la chambre de croissance dans les mêmes conditions de croissance.

    REMARQUE : Pour des raisons de sécurité et de santé, des lunettes de protection et un masque doivent être portés lors de l’infiltration. Pour éviter la contamination croisée, les gants doivent être changés ou stérilisés avec de l’éthanol entre les infiltrations. Normalement, au moins 1 mL de suspensions d’agrobacterium par feuille est nécessaire pour l’infiltration. Pour le silence systémique, au moins deux feuilles seront nécessaires pour l’infiltration.

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Matériaux

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NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Lampe UVAnalytik JenaUVP B-100APObservation

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Mots-clés

Suppression du silen age de l ARNinfiltration par Agrobacteriumsyst me rapporteur GFPNicotiana benthamianacriblage de la d fense des plantesliaison des prot ines effectricesinhibition du complexe RISC par les siARNd tection de la fluorescence

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