Évaluation in vitro de la destruction bactérienne par les phagocytes spléniques de souris chez les nouveau-nés

Résumé

Source : Seman, B. G., et.al. Modèle d’imagerie néonatale de septicémie bactérienne à Gram négatif. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo démontre l’isolement des neutrophiles et des monocytes inflammatoires des rate de souris néonatales et leur application dans un test luminescent tuant les bactéries. Il couvre la dissociation mécanique, la lyse des globules rouges, l’enrichissement cellulaire à base de billes magnétiques, l’incubation bactérienne et la protection antibiotique. Les lectures de luminescence temporelle indiquent une internalisation initiale bactérienne suivie d’une élimination par le système immunitaire.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Test in vitro de tueur bactérienne

1. Retirez la rate d’un chiot nouveau-né non infecté et placez-la dans un panier en nylon de 40 μm à l’intérieur d’une boîte de Petri stérile de 60 mm. Répétez cela et concentrez les rates dans un seul tube pour être prélevées et homogénéisées ensemble.
2. Ajoutez 5 mL de solution séline phosphatée tamponnée (PBS) complétée avec un sérum bovin fœtal (FBS) à 10 %.
3. Désagrégez le tissu à l’aide d’un piston à seringue stérile de 3 mL jusqu’à ce qu’une suspension unicellulaire soi....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tampon de lyse ACK	Gibco	LSA1049201	Dosage de dégagement bactérien
Microperles Anti-Ly-6B.2	Miltenyi Biotec	130-100-781	Isolation cellulaire
Escherichia coli O1 :K1 :H7-lux (exprime la luciférase)	N/A	N/A	Construit en interne à WVU
Tampon d’isolation	Miltenyi Biotec	N/A	Dosage de dégagement bactérien
LB Brow, Lennox	Fisher BioReagents	BP1427-500	Croissance bactérienne
Passoire EASYstion (Panier en nylon)	Greiner Bio-one	542 040	Filtre cellulaire
SpectraMax iD3	Dispositifs moléculaires	N/A	Lecteur de plaques