$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité local de soins aux animaux institutionnels et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
Visualisation de l’infection par bioluminescence
- Pour visualiser l’évolution de l’infection, insérez un opéron bioluminescent chromosomique (luxCDABE) dans les souches de Pseudomonas aeruginosa PGN5 et VE2 testées. Les plasmides et le protocole utilisés pour marquer ces souches ont été développés au laboratoire Schweizer et peuvent ne pas être compatibles avec toutes les espèces ou souches de bactéries. Il est important de noter que la visualisation de l’infection est optionnelle ; Ainsi, l’insertion génomique de cet opéron n’est pas nécessaire pour réaliser l’étude de mortalité.
- Préparez et validez les souches. De plus, vérifiez la bioluminescence des souches marquées à chaque étape de validation.
- Après la préparation des souches, injectez les animaux par groupes de 10 avec les souches bioluminescentes en suivant les étapes ci-dessus.
- Imagez les animaux toutes les 3 heures pendant 24 heures à l’aide d’un système d’imagerie animale capable de bioluminescence.
- Tout d’abord, préparez l’imageur en réglant les paramètres de la caméra et en chauffant la scène pour les animaux. Ensuite, réglez le débit d’oxygène à 1,5 L par minute (ou suivez les recommandations du fabricant).
- Après la stabilisation de l’imageur et du stade, placez une souris dans la chambre d’anesthésie immédiatement après l’injection et administrez 3,5 % d’isoflurane dans la chambre avec un écoulementd’O2 pendant environ 4 minutes. Les méthodes d’anesthésie peuvent varier selon la chambre et/ou l’agent anesthésique utilisé ; Suivez les recommandations du fabricant. Déterminer l’anesthésie appropriée via le test du réflexe de sevrage.
- Déplacez la souris vers l’étape stabilisée par la température. Placez la souris sur le dos, bras tendus, et ajustez un cône nasale pour l’administration à 2,5 % d’isoflurane tout au long de la procédure d’imagerie.
- Fermez la porte et prenez des images bioluminescentes ainsi que des rayons X de la souris.
- Une fois l’imagerie terminée, remettez la souris dans sa cage et surveillez-la. La souris devrait reprendre conscience dans les 3 à 5 minutes.
- Continuez à imager les souris toutes les 3 heures pendant 24 heures, à chaque fois en utilisant une souris différente de chaque groupe. Ne re-imagez pas une souris dans les 24 heures en raison du risque d’effets indésirables d’une réexposition à l’anesthésie. Une seule souris ne devrait recevoir qu’une seule dose d’anesthésie toutes les 24 à 36 heures. Nettoyez la plateforme d’imagerie après chaque image. Éteignez l’imageur entre les moments d’imagerie.
REMARQUE : La bioluminescence s’estompe, quelle que soit la souche injectée. L’intensité et la longévité de la bioluminescence varient selon de nombreux facteurs, notamment le nombre de bactéries injectées, la souche de souris, la souche bactérienne, etc.