Préparation d’une culture hémolytique de Staphylococcus aureus pour des études d’interaction hôte-pathogène

Résumé

Source : Behera, R.K. et al., Une méthode basée sur la fluorescence pour étudier la régulation génétique bactérienne dans les tissus infectés. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre la préparation de cultures hémolytiques de Staphylococcus aureus pour standardiser la croissance bactérienne et obtenir une synchronisation métabolique pour les études d’interaction hôte-pathogène.

Protocole

1. Préparation de l’inoculum bactérien
   1. Stries Staphylococcus aureus souches d’intérêt pour l’isolement sur des plaques d’agar sanguin à partir d’un stock de glycérol congelé. Incuber à 37 °C pendant 16 à 24 heures afin de confirmer les phénotypes hémolytiques basés sur leur capacité à lyser les globules rouges (globules rouges) et à former des zones transparentes claires.
   2. Initiez les cultures nocturnes en inoculant des colonies individuelles de chaque souche sur 4 mL de bouillon de soja tryptique (TSB) dans des tubes en verre stériles. Faites tourner les tubes à 37 °C pendant 16 à 24 heures dans un rouleau à tubes placé à un angle d’environ 70° et 70 tours par minute (RPM).
   3. Utilisez un spectrophotomètre pour mesurer la densité optique à 600 nm (OD₆₀₀) des cultures de l’étape 2.1.2. Utilisez un milieu stérile comme référence optique (blanc). Diluez ces cellules à un OD_{de 600} de 0,05 dans 25 mL de bouillon de soja tryptique stérile (TSB) en fioles DeLong séparées de 125 mL (rapport 5:1 flasque/volume) et incubez les cultures dans un bain-marie (pour un transfert de chaleur approprié vers les cultures), secouez à 280 tr/min et réglez à 37 °C.
      REMARQUE : La croissance de l’inoculum peut être réalisée de différentes manières ; Une méthode pour faire croître les cellules jusqu’à une phase exponentielle est présentée. Quoi qu’il en soit, il est important d’utiliser constamment la même méthode pour préparer les cellules à l’inoculation.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
5 % Sang de mouton	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Bain marie oscillant orbital	New Brunswick Innova	NA
Bouillon de soja tryptique	VWR	90000-376
Spectrophotomètre UV-visible	Beckman Coulter-DU350	NA