Imagerie en direct des interactions hôte-pathogène chez des embryons de poisson-zèbre infectés par Mycobacterium abcessus

Résumé

Source : Bernut, A., et al. Déchiffrer et imager la pathogenèse et le cordon de Mycobacterium abscessus chez les embryons de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo démontre un protocole utilisant des embryons transgéniques de poisson-zèbre exprimant des macrophages fluorescents et infectés par la souche rugueuse fluorescente Mycobacterium abscessus pour visualiser les interactions hôte-pathogène. Elle révèle comment le cordon extracellulaire permet l’évasion immunitaire, favorisant la survie bactérienne et les dommages aux cellules de l’hôte.

Protocole

1. Imagerie en direct de l’infection par M. abcès

1. Montez des embryons anesthésiés par tricaïne dans de l’agarose à 1 % de point de fusion bas dans une boîte de Petri de 35 mm avant les observations par microscopie d’épifluorescence. Utilisez une plaque à fond de verre pour la microscopie confocale inversée ou une lame à dépression à cavité unique pour la microscopie confocale verticale. Orientez l’embryon à la position souhaitée et couvrez l’agarose solidifiée d’eau de poisson contenant de la tricaïne.
2. Utilisez un microscope à épifluorescence avec un objectif 10X pour l’acquisition séquentielle de fluorescence et la transmission des images de l’ensemble de l’embryon. Sinon, utilisez un microscope confocal avec des objectifs 40X ou 63X pour visualiser l’activité des cellules immunitaires après une infection.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Agarose à faible fusion	Sigma-Aldrich
Éthyle 3-aminobenzoate méthanassulfonate sel (Tricaïne)	Sigma-Aldrich	A5040